一種重組工程介導的大腸桿菌基因組點突變的方法.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、重組工程(Red/ET, recombination mediated genetic engineering)是指由重組酶催化的DNA片段之間的同源重組而在大腸桿菌中進行基因克隆或DNA改造的一種基因工程技術。通過重組工程方法理論上可以對細菌基因組任意大小的DNA片段進行敲除和修飾，重組工程的優(yōu)點由于是利用PCR所獲得的DNA片段進行轉化，省略了基因克隆步驟，因而簡便、快速而高效。
　　本論文提供了一種通過重組工程來實現(xiàn)大腸桿菌

2、的基因點突變的方法。首先是通過重組工程將含有同源臂的兩個I-SceI酶切位點(S)和卡那霉素抗性基因(neo)的基因盒整合至待修飾的基因，含同源臂的S-neo-S基因盒由PCR獲得，此基因盒兩側還包含了與基因組同源的序列和待引入的突變位點。再經過cTc誘導，使I-SceI酶得到表達。誘導得到的I-SceI酶切割突變菌株上的S位點，從而使基因組發(fā)生斷裂。斷裂的基因組在生存壓力和體內重組酶的作用下再次發(fā)生同源重組，從而去掉抗性基因，得到任何

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