胸腺肽-β4在小鼠卵母細胞和早期胚胎中表達與分布規(guī)律的研究.pdf

1、胸腺肽-β4（thymosin-β4, Tb4）最初是從小牛胸腺組分Ⅴ中分離提純得到的一種分子量約為5k Da，由43個氨基酸殘基組成，親水性較強的小肽類物質?，F(xiàn)代研究證實了Tb4是一種重要的G-actin活性隱蔽因子，在細胞微絲活動中有著調節(jié)G-actin活性的作用。Tb4普遍存在于脊椎動物的組織器官和部分無脊椎動物機體當中，且具有高度的保守性。該分子還具有廣泛的生物學功能，其能夠作用于免疫調節(jié)、神經(jīng)發(fā)育、傷口愈合、炎癥反應、血管發(fā)生

2、、細胞凋亡以及腫瘤發(fā)生和遷移等眾多的生理與病理活動。但針對該分子在哺乳動物卵母細胞成熟與早期胚胎發(fā)育相關領域的研究迄今還沒有系統(tǒng)的報道。
　　 本實驗以昆明白小鼠卵母細胞和早期胚胎作為主要實驗材料，應用免疫組織化學、免疫熒光激光共聚焦和RT-PCR技術，對Tb4在相關發(fā)育過程中的表達與分布的進行了較為系統(tǒng)的研究。因實驗中發(fā)現(xiàn)Tb4在處于同細胞周期的早期胚胎細胞核、質中具有定位表達有所差異，故本研究同時進行了該分子在小鼠胚胎成纖維

3、細胞（MEFs）中的相關驗證實驗。
　　 本實驗獲得的結果表明：
　　 1.小鼠卵巢免疫組織化學結果顯示，伴隨卵泡發(fā)育，Tb4蛋白在卵母細胞中的表達量逐漸增高。該分子在初級卵泡的卵母細胞核、質區(qū)域呈現(xiàn)較弱表達，而在卵泡發(fā)育后期的卵母細胞質中表達量明顯升高，同時在核膜處表達明顯，而在細胞核內呈現(xiàn)較弱表達。同時Tb4蛋白在顆粒細胞中也有較弱程度的表達，在細胞核中也無分布。
　　 2.激光共聚焦結果表明，以染色質構型差

4、異劃分的三類發(fā)育潛力不同的GV期卵母細胞當中，Tb4蛋白的定位表達有顯著差異。
　　 3.激光共聚焦結果揭示，Tb4蛋白在小鼠卵母細胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中，存在差異性的表達和定位變化。該分子的表達與定位規(guī)律與卵母細胞和早期胚胎所處的發(fā)育階段和細胞所處周期密切相關。
　　 4.激光共聚焦結果顯示在早期著床囊胚中，Tb4蛋白在著床側細胞的表達水平較高，揭示Tb4蛋白可能通過調節(jié)微絲解聚活動對胚胎著床活動產生重要的影響。<

5、br>　　 5.由卵母細胞成熟開始，直至早期著床囊胚的形成，Tb4蛋白的表達水平呈現(xiàn)上調性變化。尤其在桑椹胚、囊胚和早期著床囊胚當中Tb4蛋白具有較高水平的表達，這與此階胚胎細胞增殖過程中的微絲活動特點相適應。
　　 6.在早期胚胎體外培養(yǎng)的過程中，Tb4 mRNA從合子時期開始出現(xiàn)上調性表達，直到桑椹胚和囊胚，其表達量達到峰值。而在2-細胞胚胎中，該分子mRNA的表達量出現(xiàn)略高于臨近發(fā)育時期的表達高峰。
　　 7.本

6、實驗證實伴有強烈微絲聚合、解聚活動的細胞形態(tài)變化過程可以影響MEFs中Tb4蛋白的定位類型。而在MEFs增殖過程中，細胞周期因素也能夠對Tb4蛋白定位類型產生顯著影響，具體為G1期細胞呈現(xiàn)高比例的細胞核強表達（NH）定位類型，而S期表現(xiàn)為高比例的細胞核弱表達（NL）定位類型。該實驗結果與胚胎實驗中出現(xiàn)的核、質定位差異現(xiàn)象的規(guī)律是一致的。
　　 8.研究發(fā)現(xiàn)Tb4蛋白在MEFs中的定位類型還與細胞生長密度有關。在不同生長密度的ME

7、Fs集落中Tb4蛋白主要定位類型也有所差異，高密度區(qū)域細胞多呈現(xiàn)細胞核強表達（NH）定位類型，而低密度區(qū)域以細胞核弱表達（NL）定位類型細胞為主。
　　
　　 本實驗結論認為Tb4主要通過執(zhí)行單體G-actin活性隱蔽的功能，對相關的微絲活動進行生理性的調節(jié)，以保證細胞的形態(tài)結構變化、生長和增殖活動的順利進行。Tb4在小鼠卵母細胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中，存在差異性的表達與分布變化，能夠對細胞中的微絲活動和細胞增殖進行