胸腺肽β-,4-分離純化工藝的研究.pdf

1、胸腺肽是胸腺分泌的具有生物活性的一類(lèi)多肽混合物,是一種免疫增強(qiáng)劑.胸腺肽β<,4>(thymosin β<,4>)是胸腺肽的一種,廣泛存在于各類(lèi)動(dòng)物器官中.研究發(fā)現(xiàn)胸腺肽β<,4>具有消炎和促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的功效,能夠促進(jìn)創(chuàng)傷部位的血管生成、膠原沉積,可促進(jìn)眼角膜的復(fù)合及頭發(fā)的再生,具有很高的醫(yī)用價(jià)值.本文主要研究了胸腺肽β<,4>分離純化的工藝,主要工作包括:離子交換介質(zhì)的篩選、胸腺肽β<,4>離子交換色譜純化工藝的建立和離子交換色譜過(guò)程

2、的優(yōu)化. 利用靜態(tài)吸附的方法,從10種離子交換介質(zhì)中篩選出CM-Sepharose FF陽(yáng)離子交換凝膠和DEAE-Sepharose:FF陰離子交換凝膠作為分離過(guò)程的離子交換介質(zhì). 胸腺肽β<,4>分離純化工藝主要包括:1)胸腺素5的提取:采用硫酸銨沉淀法,從小牛胸腺中用25﹪～50﹪的硫酸銨飽和度沉淀得到胸腺素5;2)離子交換色譜分離:首先采用CM-Sepharose FF對(duì)胸腺素5進(jìn)行分離,溶液中的目標(biāo)產(chǎn)物吸附在離子

3、交換柱上之后,分別通過(guò)1﹪、4﹪、5﹪的NaCl鹽溶液階躍洗脫,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)物存在于4﹪的洗脫峰中.其次,收集的洗脫峰吸附于DEAE-Sepharose FF上,分別通過(guò)水洗、1﹪、4﹪、5﹪的NaCl鹽溶液階躍洗脫,最終獲得純度為85.2﹪的胸腺肽β<,4>產(chǎn)品. 分離過(guò)程的優(yōu)化主要包括三部分:通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)高氯酸沉淀法更利于胸腺素5的提取;對(duì)陰陽(yáng)離子柱的操作條件進(jìn)行了優(yōu)化,優(yōu)化后CM-Sepharose FF柱的優(yōu)化條件為柱

4、長(zhǎng)30cm,洗脫流速40cm/h,DEAE-Sepharose FF柱的優(yōu)化條件為進(jìn)樣濃度4g/L、流速60cm/h、柱長(zhǎng)40cm;對(duì)脫鹽過(guò)程進(jìn)行了優(yōu)化,采用凝膠過(guò)濾脫鹽要比透析效率更高.采用優(yōu)化后的分離條件進(jìn)行分離,所得胸腺肽p4產(chǎn)品純度為90.8﹪. 對(duì)分離得到的胸腺肽β<,4>產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè).采用非變性凝膠電泳對(duì)胸腺肽β<,4>產(chǎn)品的活性進(jìn)行了檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果表明產(chǎn)品具有活性.采用質(zhì)譜檢測(cè)了產(chǎn)品的氨基酸序列,所得結(jié)果與文獻(xiàn)中一