胸腺肽的認(rèn)識(shí)與對(duì)比

1、幾種不同的胸腺肽藥物,胸腺激素類(lèi)免疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展 ----胸腺肽,胸腺肽最早是由雪蘭諾公司從小牛胸腺提取的一種胸腺因子,1980年在意大利上市,爾后在歐美注冊(cè)和臨床。生產(chǎn)廠家已超過(guò)百余家，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）已核準(zhǔn)下發(fā)了389個(gè)注射劑生產(chǎn)批文，有8家企業(yè)生產(chǎn)口服制劑。胸腺肽的主要?jiǎng)┬陀校簝龈煞坩槃?、注射液、腸溶片、腸溶膠囊和胸腺肽氯化鈉注射液5種。,胸腺激素類(lèi)免疫調(diào)節(jié)劑

2、發(fā)展 ----胸腺肽,但由于胸腺肽有效成分不明確、含量低、含致敏大分子蛋白，不符合WHO對(duì)免疫調(diào)節(jié)劑的五項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)（1、化學(xué)成分明確；2、易于降解；3、刺激適中；4、不致癌，致畸變；5、無(wú)累積毒性，無(wú)不良反應(yīng)及后繼作用），因而療效低、安全性差，不良反應(yīng)尤其是嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)頻繁發(fā)生，由此引發(fā)了國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心對(duì)該類(lèi)藥品進(jìn)行通報(bào)。,胸腺激素類(lèi)免疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展

3、 ----胸腺五肽,在對(duì)胸腺素類(lèi)藥物的研制中，科學(xué)家通過(guò)化學(xué)合成的方法制造出了胸腺生成素Ⅱ，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步開(kāi)發(fā)了胸腺五肽。1985年，胸腺五肽在意大利以商品名“Timunox”上市。1997年，我國(guó)研發(fā)合成胸腺五肽，隨后四川源基制藥、北京雙鷺?biāo)帢I(yè)、丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)等企業(yè)的產(chǎn)品也獲準(zhǔn)生產(chǎn)。截至2006年6月，SFDA已核準(zhǔn)36家企業(yè)生產(chǎn)胸腺五肽原料藥及其注射劑。胸腺五肽的主要?jiǎng)┬陀校簝龈煞坩槃?、注射?胸腺激素類(lèi)免

4、疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展 ----胸腺肽α1(Tα1),在上世紀(jì)末，意大利賽生公司的產(chǎn)品“胸腺肽α1”已進(jìn)入我國(guó)市場(chǎng)，而且在國(guó)外也已在30多個(gè)國(guó)家獲得批準(zhǔn)上市。2002年底，SFDA批準(zhǔn)成都地奧九泓、海南雙成藥業(yè)、海南中和藥業(yè)生產(chǎn)原料藥及注射劑。胸腺肽α1(Tα1)的主要?jiǎng)┬陀校悍坩槃?胸腺類(lèi)制劑的發(fā)展,普通胸腺肽

5、 安全性大大提高 胸腺五肽 安全性和療效都實(shí)現(xiàn)了質(zhì)的飛躍 胸腺肽α1,,,,被2010版藥典收載：安全，有效，質(zhì)量可控,胸腺肽α1受到高度認(rèn)可,被2010版中

6、國(guó)藥典收載胸腺肽、胸腺五肽未被收入進(jìn)入《國(guó)家基本醫(yī)療保險(xiǎn)、工傷保險(xiǎn)和生育保險(xiǎn)藥品目錄（2009年版）》胸腺肽、胸腺五肽、亮菌甲素、香菇多糖、免疫核糖核酸等均未進(jìn)入 進(jìn)入《中國(guó)國(guó)家處方集》收錄于腫瘤項(xiàng)下,神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)主要通過(guò)神經(jīng)纖維、神經(jīng)遞質(zhì)和激素調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能；免疫系統(tǒng)則通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子，反饋信息，調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)。,胸腺肽類(lèi)激素種類(lèi)及功能,,,,（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)通式,天然氨基酸在結(jié)構(gòu)上的共同特點(diǎn)為：,(1)

7、. 與羧基相鄰的α-碳原子上都有一個(gè)氨基，因而稱(chēng)為α-氨基酸(2). 除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-碳原子都為不對(duì)稱(chēng)碳原子,所以：A.氨基酸都具有旋光性。B.每一種氨基酸都具有D-型和L-型兩種立體異構(gòu)體。目前已知的天然蛋白質(zhì)中氨基酸都為L(zhǎng)-型。,氨基酸的構(gòu)型和存在形式,構(gòu)型（用D、L表示）：,?-氨基酸通式,除甘氨酸，天然?-氨基酸都是有旋光的，而且都是L型的。,L型?-氨基酸,D型?-氨基酸,L-甘油醛,+,,

8、甘氨酰甘氨酸,肽鍵,,（二）肽： 肽鍵是由一個(gè)氨基酸的?-羧基與另一個(gè)氨基酸的?-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。,,,,蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括 一級(jí)結(jié)構(gòu)(primary structure)二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondary structure)三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiary structure)四級(jí)結(jié)構(gòu)(quaternary structure),蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序。,一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)(

9、Primary structure）,主要的化學(xué)鍵肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,15,20,25,28,,,Ala,Asp,Ala,Ala,Val,Asp,Thr,Ser,Ser,Glu,Thr,Thr,Lys,Asp,Leu,Lys,Lys,Glu,Val,Val,Glu,Glu,Ala,Glu,Asn,Ile,Lys,Glu,--OH,Ac--,胸腺肽α1,化學(xué)合成的28

10、個(gè)氨基酸組成的多肽, 純度 > 99.8% 正常人血清濃度為400-1000pg/ml,10,5,二、蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),主要的化學(xué)鍵： 氫鍵,(二）主鏈構(gòu)象的分子模型,?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折疊 ( ?-pleated sheet ) ?-轉(zhuǎn)角 ( ?-turn ) 無(wú)規(guī)卷曲 ( random coil ),1. ?-螺旋,左手和右手螺旋,2. ?-折疊,①在?-折疊中，?-碳原子總是處于折疊的

11、角上，氨基酸的R基團(tuán)處于折疊的棱角上并與棱角垂直，兩個(gè)氨基酸之間的軸心距為0.35nm.② ?-折疊結(jié)構(gòu)的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的；也可以在同一肽鏈的不同部分之間形成。幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長(zhǎng)軸接近垂直。③?-折疊有兩種類(lèi)型。一種為平行式，即所有肽鏈的N-端都在同一邊。另一種為反平行式，即相鄰兩條肽鏈的方向相反。,3. ?-轉(zhuǎn)角,?-轉(zhuǎn)角,在?-轉(zhuǎn)角部分，由四個(gè)氨基酸殘基組成.四個(gè)形成轉(zhuǎn)角的殘基中，第三個(gè)

12、一般均為甘氨酸殘基．彎曲處的第一個(gè)氨基酸殘基的 -C=O 和第四個(gè)殘基的 –N-H 之間形成氫鍵，形成一個(gè)不很穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。這類(lèi)結(jié)構(gòu)主要存在于球狀蛋白分子中。,超二級(jí)結(jié)構(gòu)　　α α；ββ；βαβ；βββ．,α α,ββ,βαβ,（三）超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域,三、蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu),整條肽鏈中全部氨基酸殘基的三維空間的排布位置。,四、蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱(chēng)為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。,一級(jí)結(jié)

13、構(gòu)→二級(jí)結(jié)構(gòu)→三級(jí)結(jié)構(gòu)→亞基→四級(jí)結(jié)構(gòu),總結(jié)：蛋白質(zhì)分子從一級(jí)結(jié)構(gòu)到高級(jí)結(jié)構(gòu),,,胸腺肽α1與普通胸腺肽的比較,注：胸腺肽實(shí)際有效成分就是胸腺肽α1，但含量極低（不到0.6%）,,從工藝上說(shuō)，普通胸腺肽以動(dòng)物胸腺為原料，經(jīng)過(guò)搗碎、提取、離心、過(guò)濾，分裝。普通胸腺肽所標(biāo)示的20mg、50mg等，實(shí)際上是總蛋白含量。也就是含氮物質(zhì)總量。在新的試行標(biāo)準(zhǔn)中，為提高質(zhì)量，規(guī)定必須含有一定比例的胸腺肽α1。這實(shí)際上從另一方面證明普通胸腺肽中實(shí)際

14、真正起作用的是胸腺肽α1，但可惜的是普通胸腺肽中胸腺肽α1的含量只有0.6%左右。,胸腺肽α1與胸腺五肽的比較,,注：胸腺五肽給藥方式和劑量國(guó)內(nèi)外相差極大，缺少循證醫(yī)學(xué)證據(jù)支持,,胸腺肽α1與胸腺五肽最大的不同在于胸腺肽α1是人體內(nèi)源性物質(zhì)，與體內(nèi)的胸腺肽α1結(jié)構(gòu)和活性都完全一致，都是28肽。而胸腺五肽卻不是人體內(nèi)源性物質(zhì)，只是胸腺生成素II的一個(gè)片段，胸腺生成素II是49肽，五肽卻是只有5個(gè)氨基酸的寡肽，連蛋白質(zhì)的3級(jí)結(jié)構(gòu)都不具有，

15、很難說(shuō)其具有胸腺生成素II的全部活性?？赡苷?yàn)槿绱?，五肽僅在中國(guó)和意大利被批準(zhǔn)上市。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,15,20,25,28,,,Ala,Asp,Ala,Ala,Val,Asp,Thr,Ser,Ser,Glu,Thr,Thr,Lys,Asp,Leu,Lys,Lys,Glu,Val,Val,Glu,Glu,Ala,Glu,Asn,Ile,Lys,Glu,--OH,Ac--,ZADAXIN(胸腺肽

16、α1)注射液,化學(xué)合成的28個(gè)氨基酸組成的多肽, 純度 > 99.8% 正常人血清濃度為400-1000pg/ml,10,5,T??1－在活體外的免疫調(diào)節(jié)功能,? 細(xì)胞因子及受體方面,,,? T細(xì)胞的增生及分化方面,,白介素2（IL－2）的濃度 ?干擾素（IFN－ ?）的濃 度 高親和力IL－2受體的表達(dá) ? 干擾素（IFN－ ? ）的濃 度,,,,,,CD3＋， CD4＋及CD8

17、＋細(xì)胞的增生 由地塞大米松誘發(fā)的胸腺細(xì)胞凋亡激活NK細(xì)胞活性 CFU的前體細(xì)胞數(shù)目,,,,胸腺肽α1增加Th1 亞型,Andreone et al (2001) Journal of Viral Hepatitis 8: 194-201,* p< 0.05,CD4,Th1 細(xì)胞分泌 IL-2, INF g,Th2 細(xì)胞分泌 IL-4, IL-1

18、,,,*,*,*,*,*,*,,,HCV陽(yáng)性病人的外周單核細(xì)胞經(jīng)胸腺肽α1培育,Th1在抗肝炎治療中是清除病毒所必需,胸腺肽α1增加NFkB轉(zhuǎn)錄因子表達(dá),,,,胸腺肽α1 (胸腺肽α1)啟動(dòng)人體免疫機(jī)制來(lái)抗病毒、抗癌,增加靶細(xì)胞MHC-I類(lèi)抗原的表達(dá)直接抑制病毒的復(fù)制直接抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,增產(chǎn) NK , CD4+,CD8+,Th1,增加IL-2,INF-γ,IL-2R,胸腺肽α1的雙重作用機(jī)制,免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,直接抗病毒、腫瘤

19、機(jī)制,,,STEM CELL,NK CELL,胸腺肽α1作用機(jī)制,靶細(xì)胞,靶細(xì)胞,CD4+ T-CELL,CD8+ T-CELL,? IL-2, INF-γ,,Th1,CTL,,間接作用促進(jìn)T細(xì)胞的增生和分化促進(jìn)細(xì)胞因子的表達(dá)(IL-2、INF、IL2R）,,直接作用增強(qiáng)MHC-I類(lèi)抗原表達(dá)直接抑制病毒的復(fù)制增強(qiáng)谷胱苷肽的水平,胸腺肽α1的作用機(jī)制,胸腺肽α1的臨床應(yīng)用,1、在慢性病毒性肝炎治療中的應(yīng)用2、在腫瘤治療

20、中的應(yīng)用3、在免疫功能低下人群中作為疫苗增強(qiáng)劑的 應(yīng)用　4、在其他領(lǐng)域中的應(yīng)用　 各種免疫功能缺陷和異?；颊咄殡S有免疫功能低下,因此胸腺素α1在臨床上已開(kāi)始被應(yīng)用于治療重癥感染、慢性腎炎、紅斑狼瘡、風(fēng)濕或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及艾滋病等疾病的治療中,且均表現(xiàn)出不同程度的臨床療效.,胸腺肽a1的合成工藝,胸腺肽a1是一條由28個(gè)氨基酸構(gòu)成的肽鏈，人工合成時(shí)，是將首個(gè)氨基酸固定于固體樹(shù)脂上，通過(guò)28步反應(yīng)(含末端乙?；徊?，

21、將其他27個(gè)氨基酸一個(gè)個(gè)分別按序列接上，然后將整條肽鏈自樹(shù)脂上“切割”下來(lái)，得到的粗品再進(jìn)入純化階段，經(jīng)多級(jí)次色譜柱分離，最終得到純度極高的胸腺肽a1單體。以上是對(duì)采用固相多肽合成技術(shù)生產(chǎn)胸腺肽a1的最簡(jiǎn)單描述。首先，任何化學(xué)反應(yīng)均受化學(xué)平衡常數(shù)的制約，每一步反應(yīng)收率均<100％；假設(shè)肽合成反應(yīng)的每一步收率均達(dá)到90％，則連續(xù)28步反應(yīng)之后終產(chǎn)品收率僅5％(0．9的28次方)；其次，在經(jīng)歷如此多步合成反應(yīng)之后，終產(chǎn)品中混雜的各

22、步反應(yīng)中間體種類(lèi)近乎天文數(shù)字，為得到高純度胸腺肽a1單體，勢(shì)必進(jìn)行多級(jí)多次純化，每次純化過(guò)程又都涉及產(chǎn)品收率問(wèn)題，目標(biāo)肽分子在純化過(guò)程中的損失在所難免。,,,磁共振成像（MRI） 證實(shí)一： 在氨基酸5～8間有β樣折疊結(jié)構(gòu),進(jìn)口胸腺肽α1具有獨(dú)特的二維空間結(jié)構(gòu),,磁共振成像（MRI） 證實(shí)二： 在氨基酸17～24間形

23、成的?樣螺旋形結(jié)構(gòu),進(jìn)口胸腺肽α1具有獨(dú)特的二維空間結(jié)構(gòu),相互作用后可引發(fā)產(chǎn)生一連串的生物學(xué)效應(yīng)：1.增強(qiáng)淋巴細(xì)胞分泌白介素（IL-2）、?及?干擾素；2.增強(qiáng)淋巴細(xì)胞表膜IL-2受體的表達(dá)作用；3.增強(qiáng)NK細(xì)胞的驀集及殺傷能力；4.增強(qiáng)混合性淋巴細(xì)胞的反應(yīng)。,二維空間結(jié)構(gòu)是與淋巴細(xì)胞膜結(jié)合首要條件,胸腺肽α1中所有氨基酸均為左旋形式,,胸腺肽α1與仿制品的區(qū)別,胸腺肽α1與胸腺五肽的區(qū)別,HBV的治療選擇,,胸腺肽α1

24、74;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,核苷酸類(lèi)似物,TH,TS,干擾素,NK,,,TC,+,+,+,-,+,+,+,-,-,拉米夫定Lamivudine,,Regev A, Schiff ER. Drug therapy for hepatitis B. Adv Intern Med 2001;46:107-35.,乙肝病毒本身并不引起明顯的肝細(xì)胞損傷。肝細(xì)胞的損傷主要是由免疫病理引起的，也就是機(jī)體的免

25、疫反應(yīng)在清除HBV的過(guò)程中造成了肝細(xì)胞的損傷。,胸腺肽α1顯著誘導(dǎo)PBMC細(xì)胞2’，5’—寡腺甘酸合成酶（2-5OAS）的增加；聯(lián)合二者更有相乘的作用（2-5OA是一種抗病毒蛋白）。,(mmol/ml),p<0.05,*,p<0.05,*,p<0.01,*,2-5 OAS,胸腺肽α1通過(guò)增加Th1,降低Th2免疫反應(yīng)治療慢乙肝,胸腺肽α1顯著誘導(dǎo)2-5OAS的增加,*A.Gramenzi et al. Hepato

26、logy,Vol 42,No.4,suppl.1,2005,干擾素a誘導(dǎo)PBMC細(xì)胞分泌IL-4。胸腺肽α1顯著降低IL-4水平，而干擾素誘導(dǎo)IL-4分泌增加。*與控制組比較**與干擾素組比較,(pg/ml),IL-4,(10³U/ml),(10ug/ml),p<0.05,*,p<0.01,**,*A.Gramenzi et al. Hepatology,Vol 42,No.4,suppl.1,2005,胸腺

27、肽α1通過(guò)增加Th1,降低Th2免疫反應(yīng)治療慢乙肝,胸腺肽α1顯著降低IL-4的生成,單用治療慢乙肝（薈萃分析）,治療結(jié)束隨訪6—12月時(shí)評(píng)估 ; 完全反應(yīng)：ALT復(fù)常 + DNA 陰轉(zhuǎn)或HbeAg + DNA,慢乙肝的聯(lián)合治療,,,胸腺肽?1與拉米夫定聯(lián)合治療慢性乙型肝炎近期療效研究,,* p=0.3780 ** p=0.3780# p=0.4000 ## p=0.0012^ p=0.0344 ^^

28、 p=0.0119,中山醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院傳染科：林炳亮 黃桂梅 楊紹基等,胸腺肽α1與干擾素的持續(xù)反應(yīng)率比較。本研究再次證實(shí)胸腺肽α1停藥后的持續(xù)反應(yīng)率增加。,31％,48％,46％,27％,胸腺肽α1,干擾素,胸腺肽α1治療e抗原陽(yáng)性慢乙肝的中國(guó)報(bào)告,停藥6個(gè)月后胸腺肽α1持續(xù)應(yīng)答率仍保持良好,*You J. et al World J Gastroenterol.2006 Nov 7(41):6715-21,,,,,

29、,小結(jié),內(nèi)毒素,炎性介質(zhì),細(xì)菌感染,肝細(xì)胞損傷,T?1,,,,,微循環(huán)障礙,,,,,,,,,,胸腺肽α1治療重癥肝炎的免疫調(diào)節(jié)研究 （黃自存等）,N＝18 T?1 1.6mg 隔天或 BIW?1月,200018001600140012001000 800,,,302010,0,0.125,0.026,8.9,11.2,8.8,23.8,18.7,21.7,813,2004,1208,治療前后有顯著差異，所有指

30、標(biāo)P＜0.01,?g/ml,胸腺肽α1聯(lián)合干擾素治療慢丙肝（薈萃分析）,*對(duì)INF無(wú)應(yīng)答或復(fù)發(fā)病人**不能耐受INF副作用者，單用Tα1，為期一年,胸腺肽α1適用于下列感染人群,細(xì)菌引起的高熱持續(xù)不退病人免疫低下創(chuàng)口難愈病人有嚴(yán)重感染史者年老體弱的患者欲行重大手術(shù)者,胸腺肽α1增加巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞吞噬及殺菌能力,取自無(wú)感染的小鼠支氣管肺泡巨噬細(xì)胞和外周中性細(xì)胞,預(yù)先用Tα1培養(yǎng),后暴露于孢子,測(cè)定吞噬能力和殺孢子能力,*T

31、hymosin and Dendritic cells in Aspergilosis.Blood,1 June 2004,volume 103,No. 11, 4237,,,,,,,,,80,40,0,100,50,0,100,50,0,100,50,0,*,*,*,*,%吞噬能力,%殺孢子活性,巨噬細(xì)胞,中性細(xì)胞,活體外,無(wú),胸腺肽α1,無(wú),胸腺肽α1,小鼠肺DC細(xì)胞預(yù)先用Ta1(100mg/ml)培育60分鐘，然后分別暴露于曲霉屬

32、微菌的孢子或菌絲在37℃培育60分鐘，測(cè)定DC細(xì)胞的噬能力，以內(nèi)在百分率(% of internalization)來(lái)表示。*p<0.05,胸腺肽α1――增強(qiáng)DC細(xì)胞的吞噬能力,DCs,DCs+thymosin α1,DCs,DCs+thymosin α1,曲霉屬孢子,曲霉屬菌絲,*Thymosin and Dendritic cells in Aspergilosis.Blood,1 June 2004,volume 1

33、03,No. 11, 4237,顯示胸腺肽α1對(duì)衍生自TAM的樹(shù)突細(xì)胞(DC)形態(tài)學(xué)上的改變。圖a是使用PBS對(duì)照，只有23%DC看到細(xì)胞質(zhì)突出，而圖b胸腺肽α1組有60%。,胸腺肽α1—激活DCs細(xì)胞,胸腺肽α1可降低重度感染患者的死亡率,,陳江 《中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)》2007年3月第19卷第3期 P153-155,,胸腺肽α1可以提高抗生素的療效，縮短ICU和總住院時(shí)間,,陳江 《中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)》2007年3月第19卷第3期