2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  通過(guò)建立大鼠主動(dòng)脈弓縮窄(transverse aortic constriction,TAC)模型,觀察左心負(fù)荷增高對(duì)肺血流動(dòng)力學(xué)及肺血管重構(gòu)的影響;利用芯片篩選出TAC大鼠模型肺組織表達(dá)變化的microRNA譜,分析其調(diào)控的靶基因與信號(hào)通路,并在組織和循環(huán)水平上進(jìn)行驗(yàn)證,分析循環(huán)microRNA變化與血流動(dòng)力學(xué)的相關(guān)性;通過(guò)臨床病例驗(yàn)證,進(jìn)一步探索microRNA對(duì)PH-LHD的預(yù)測(cè)意義。
  方法:

2、  第一部分:
  1.建模:40只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為Sham組(n=20)和TAC組(n=20),TAC組在主動(dòng)脈弓處以16G針頭墊扎,形成主動(dòng)脈弓縮窄;Sham組不結(jié)扎主動(dòng)脈弓。
  2.檢測(cè)指標(biāo):1)一般情況;2)心臟超聲檢測(cè)大鼠心臟重構(gòu)和功能;3)心導(dǎo)管檢查明確血流動(dòng)力學(xué)變化;4)病理學(xué)觀察肺血管重構(gòu)。
  第二部分:
  1.利用microRNA芯片檢測(cè)TAC和Sham大鼠肺組織樣本,篩選micr

3、oRNA的差異表達(dá)譜,并使用miR-Path v.3預(yù)測(cè)經(jīng)過(guò)聚類的兩組差異microRNA靶基因,得到靶基因的富集結(jié)果,預(yù)測(cè)PH-LHD相關(guān)信號(hào)通路。
  2.采用基于SYBR Green熒光染料的方法對(duì)肺組織差異表達(dá)的microRNA行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)驗(yàn)證;進(jìn)一步檢測(cè)大鼠血清microRNA水平,并統(tǒng)計(jì)分析其與大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性。
  第三部分:
  1.根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)選取于2014年6月至2016年11

4、月在第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科就診患者,以PASP≥50mmHg作為診斷PH的依據(jù),收集PH-LHD患者34例、單純LHD46例。采集受試者的基本資料與臨床數(shù)據(jù):年齡、性別、身高、體重、吸煙史、體重指數(shù)、血壓、心率、紐約心功能分級(jí)、心臟超聲檢測(cè)數(shù)據(jù)、BNP。采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)所有受試者血清中microRNA水平,分析其與臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性。
  2.使用SPSS軟件(版本20.0,IBM公司,美國(guó))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用中

5、位數(shù)和四分位數(shù)間距表示,計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分比表示;組間資料的差異采用Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行分析;采用Spearman相關(guān)系數(shù)評(píng)估m(xù)iR-149水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性;采用logistic回歸進(jìn)行單因素、多因素分析,并計(jì)算得到比值比、95%可信區(qū)間;采用ROC曲線進(jìn)行預(yù)測(cè)價(jià)值分析,并計(jì)算到曲線下面積、敏感度、特異度。
  結(jié)果:
  第一部分:
  1.手術(shù)過(guò)程中因麻醉意外、氣胸、主動(dòng)脈破裂原因?qū)е?/p>

6、TAC組3只死亡,Sham組9只死亡;在8周的飼養(yǎng)過(guò)程中,觀察到與Sham組相比,TAC組模型體重減輕,四肢及胸前區(qū)出現(xiàn)青紫,精神狀態(tài)欠佳,共計(jì)7只在飼養(yǎng)過(guò)程中死亡;最后得到10只TAC模型,11只Sham模型。進(jìn)一步稱重測(cè)量表明,與Sham組相比,TAC組右心肥厚指數(shù)(RVHI)升高(23.46±0.77%vs27.40±2.68%;P=0.010)。
  2.模型建立8周時(shí),心臟超聲檢查提示,與Sham組(n=11)相比,TA

7、C組(n=10)肺動(dòng)脈直徑增大:2.61(2.50,3.31)mm vs2.97(2.75,3.25)mm(P<0.05);左室射血分?jǐn)?shù)降低:84.99(79.53,88.46)%vs69.75(56.57,82.61)%(P<0.05);左室心肌質(zhì)量增加:573.27(465.68,677.54)mg vs680.77(588.27,836.55)mg(P<0.05);舒張期左室體積增大:160.40(125.04,187.51)ul

8、 vs201.86(162.47,217.21)ul(P<0.05)。
  3.模型建立8周時(shí),右心導(dǎo)管檢查發(fā)現(xiàn),與Sham組(n=11)相比,TAC組(n=10)mean pulmonary arterial pressure(mPAP)升高(16.22±2.23mmHg vs22.13±2.74mmHg;P<0.001),其中90%的模型大鼠mPAP介于19-24mmHg之間,屬于臨界PH;1只模型大鼠mPAP達(dá)到28.64m

9、mHg,形成PH。同時(shí)LVSP(140.04±28.01mmHg vs172.22±29.17mmHg;P<0.001)、RVSP(26.66±2.74mmHg vs29.12±2.08mmHg;P=0.031)升高,LV Max(dp/dt)(12278.66±1309.28m mHg/s vs9124.76±838.36mmHg/s;P<0.001)、RV Max(dp/dt)(1892.47±272.69mmHg/s vs1491

10、.78±261.20mmHg/s;P=0.003)降低。
  第二部分:
  1.以Sham組大鼠肺組織為對(duì)照,經(jīng)microRNA芯片分析,一共對(duì)385個(gè)microRNA進(jìn)行檢測(cè)分析,篩選出TAC組水平差異大于1.5倍且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的microRNA,差異基因經(jīng)過(guò)聚類分析排除個(gè)體差異,發(fā)現(xiàn)較Sham組,TAC組上調(diào)的有rno-miR-143-3p、rno-miR-181a-5p、rno-miR-125b-1-3p,下調(diào)的有

11、rno-miR-206-3p、rno-let-7b-5p、rno-miR-200b-3p、rno-miR-21-5p、rno-let-7b-5p、rno-miR-149-3p,進(jìn)一步KEGG信號(hào)通路分析發(fā)現(xiàn)差異變化的microRNA靶基因(其中包括Tnf、Chrd、Smad2、Smad7、Acvr1c、Acvr2a、Rps6kb1、Smurf2、Bmp5、Tgfbr1)的功能集中于TGF-β信號(hào)通路。
  2.進(jìn)一步驗(yàn)證大鼠肺組織

12、miR-149水平,發(fā)現(xiàn)TAC組miR-149水平下調(diào),RQ值分別為(1.141±0.201vs0.300±0.028;P<0.001)。檢測(cè)TAC大鼠血清miR-149水平,發(fā)現(xiàn)變化趨勢(shì)與肺組織一致,相對(duì)定量(RQ)值分別為(1.018±0.060vs0.467±0.047;P<0.001);統(tǒng)計(jì)分析循環(huán)miR-149水平與大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)相關(guān)性分析,循環(huán)miR-149水平與mPAP(r=-0.752,P<0.001)、RVHI(r

13、=-0.643,P=0.002)呈負(fù)相關(guān),與LVSP(r=0.739,P<0.001)、RVMax(dp/dt)(r=0.534,P=0.013)、LVMax(dp/dt)(r=0.728,P<0.001)呈正相關(guān),與RVSP(r=-0.309,P=0.173)統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)相關(guān)性。
  第三部分:
  1.檢測(cè)受試者循環(huán)miR-149水平,發(fā)現(xiàn)LHD對(duì)照組以及PH-LHD組RQ值分別為1.00(0.73,1.81)vs0.58

14、(0.49,1.08),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)析PH-LHD組miR-149的表達(dá)顯著低于LHD組(P=0.002)。采用Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)受試者循環(huán)miR-149與PASP(r=-0.286,P=0.010)、左心室舒張末期內(nèi)徑(r=-0.345,P=0.002)、BNP(r=-0.306,P=0.006)、紐約心功能分級(jí)(r=-0.232,P=0.038)呈負(fù)相關(guān);與LVEF呈正相關(guān)(r=0.247,P=0.027)。
  2.

15、通過(guò)logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),循環(huán)miR-149降低,PASP≥50mmHg發(fā)生的可能性增高。應(yīng)用ROC曲線評(píng)估m(xù)iR-149對(duì)PASP≥50mmHg發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值:AUC=0.699,95%CI:0.579~0.820(P=0.002),其最佳閾值為0.52,敏感度為0.500,特異度為0.891。采用二元Logistic正向逐步回歸篩選出預(yù)測(cè)PASP≥50mmHg的聯(lián)合標(biāo)志物為左心房舒張末期內(nèi)徑、循環(huán)miR-149和BNP并獲得

16、其預(yù)測(cè)模型,ROC分析表明預(yù)測(cè)模型曲線下面積(AUC)為0.889(95%CI:0.818~0.960,P<0.001),閡值為0.41時(shí)敏感度為0.882,特異度為0.818,較單獨(dú)循環(huán)miR-149預(yù)測(cè)價(jià)值高。
  結(jié)論:
  1.主動(dòng)脈弓縮窄導(dǎo)致左心負(fù)荷增高和左心功能降低的同時(shí),引起肺動(dòng)脈壓輕度增高和右心功能損害。
  2.主動(dòng)脈弓縮窄導(dǎo)致左心負(fù)荷增高和左心功能降低時(shí),肺組織microRNA表達(dá)譜發(fā)生變化,其中r

17、no-miR-143-3p、rno-miR-181a-5p、mo-miR-125b-1-3p上調(diào),rno-miR-206-3p、rno-let-7b-5p、rno-miR-200b-3p、rno-miR-21-5p、rno-let-7b-5p、rno-miR-149-3p下調(diào),KEGG信號(hào)通路分析發(fā)現(xiàn)芯片篩選的差異變化microRNA靶基因的功能集中于TGF-β信號(hào)通路。
  3.動(dòng)物模型中TAC組大鼠肺組織和循環(huán)miR-149水

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