TWEAK促進(jìn)人肝星狀細(xì)胞遷移及其機(jī)制探討.pdf

1、背景:肝纖維化是多種慢性肝病進(jìn)展至肝硬化的中間過(guò)程，它的各種并發(fā)癥嚴(yán)重的影響著慢性肝病病人的生活質(zhì)量及預(yù)后。目前為止，肝纖維化的治療仍沒(méi)有效果確切的藥物。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells，HSCs)的活化是肝纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程的核心環(huán)節(jié)，其活化后合成大量細(xì)胞外基質(zhì)，為肝硬化假小葉的形成創(chuàng)造條件。基于此，活化的HSCs自然成為逆轉(zhuǎn)肝纖維化的重要靶點(diǎn)。腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導(dǎo)因子(Tumor necrosis fac

2、tor-like weak inducer ofapoptosis，TWEAK)是一個(gè)多功能的細(xì)胞因子，有促炎、血管再生及調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育及凋亡的作用。在肝再生時(shí)，已有研究表明TWEAK在肝臟中的主要功能是促進(jìn)肝臟原始細(xì)胞的增值，而TWEAK在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所起的作用仍沒(méi)有被探討。
　　目的:本研究通過(guò)觀察TWEAK對(duì)人肝星狀細(xì)胞株--LX-2細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、遷移能力的影響，并探討其中的機(jī)制，以期為肝纖維

3、的治療提供分子靶點(diǎn)依據(jù)。
　　方法:用不同濃度TWEAK培養(yǎng)LX-2細(xì)胞24 h或48 h，采用CCK-8法檢測(cè)TWEAK對(duì)LX-2細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡，Transwell小室檢測(cè)LX-2細(xì)胞遷移能力。實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和蛋白印記用于檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)、α-SMA、vimentin和desmin的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)用于檢測(cè)MMPs的

4、活性。運(yùn)用siRNA技術(shù)對(duì)LX-2中的MMP9和p65的表達(dá)進(jìn)行干擾。運(yùn)用鬼筆環(huán)肽染色對(duì)LX-2的形態(tài)進(jìn)行觀察。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相比，20 ng/mL、40 ng/mL和100 ng/mL TWEAK都能明顯的增強(qiáng)LX-2細(xì)胞的遷移能力，且100 ng/mL較40 ng/mL TWEAK作用更強(qiáng);40ng/mL、100 ng/mL TWEAK對(duì)LX-2細(xì)胞的增殖、周期及凋亡無(wú)明顯影響。TWEAK明顯增加了MMP7、MMP8、M

5、MP9和MMP13的表達(dá)，并且使MMP9的活性增強(qiáng)，使用MMP9 siRNA將MMP9干擾之后，減弱了TWEAK促進(jìn)的LX-2細(xì)胞的遷移;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，TWEAK通過(guò)活化經(jīng)典的NF-κB信號(hào)通路進(jìn)而增加MMP9的表達(dá)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，TWEAK增加了LX-2細(xì)胞中活化肝星狀細(xì)胞的分子標(biāo)志α-SMA、vimentin和desmin的表達(dá)，并且改變了LX-2的細(xì)胞形態(tài)。
　　結(jié)論:TWEAK通過(guò)NF-κB/MMP9信號(hào)通路增強(qiáng)LX-2細(xì)胞