牛磺膽酸對肝細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制.pdf

1、目的：膽汁淤積即膽汁生成或排泌發(fā)生障礙，膽汁酸在肝內(nèi)積聚使肝細(xì)胞暴露于持續(xù)升高的膽汁酸中，最終導(dǎo)致肝損傷、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞壞死。肝細(xì)胞損傷引發(fā)肝鄰近細(xì)胞(枯否細(xì)胞的激活、肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell，HSCs)以及其他炎性細(xì)胞）的招募和活化，持久反復(fù)的肝星狀細(xì)胞的激活引起以廣泛瘢痕形成以及肝結(jié)構(gòu)和功能紊亂為特征的肝纖維化、肝硬化。一項統(tǒng)計學(xué)分析顯示，2010年全球由于肝硬化引起死亡的人數(shù)已經(jīng)超過1百萬。因此，肝

2、硬化是全球健康醫(yī)療系統(tǒng)的一個極大負(fù)擔(dān)，絕大多數(shù)的肝硬化只能被控制，并不能被治愈。因此，找到新的危險因素以及可能的治療靶點對于防治肝硬化以及藥物開發(fā)具有重要意義。
　　膽汁淤積是終末期肝硬化普遍的病理生理狀態(tài)，以往研究表明膽汁酸與肝硬化的進(jìn)展有關(guān)。我們團(tuán)隊也發(fā)現(xiàn)某些特定膽汁酸的組成在肝硬化患者中發(fā)生改變。本課題組前期通過超高相液相色譜質(zhì)譜連用儀(Liquid chromatography tandem mass spectromet

3、ry，LC-MS/MS)檢測了32名肝硬化患者以及27名健康志愿者的12種血清膽汁酸的濃度，結(jié)果顯示?；悄懰?Taurocholic acid，TCA)、甘氨膽酸(Glycocholic acid，GCA)、牛磺脫氧膽酸（Taurochenodeoxycholic acid，TCDCA）發(fā)生顯著改變，這三種差異膽汁酸在肝硬化患者血清中明顯增加，其中TCA升高最顯著。此外，肝硬化患者血清TCA水平與肝硬化嚴(yán)重程度評價指標(biāo)——Child-P

4、ugh正相關(guān)。然而這些特定膽汁酸在促進(jìn)肝硬化的機(jī)制并不清楚，因此，本研究通過細(xì)胞及分子學(xué)研究模擬肝硬化狀態(tài)下的體內(nèi)微環(huán)境，旨在探究TCA對肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：肝星狀細(xì)胞系LX-2以及肝細(xì)胞系HepG2的細(xì)胞實驗用來探究?；悄懰釋Ω渭?xì)胞、肝星狀細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制。分別對LX-2細(xì)胞、HepG2細(xì)胞以及Tranwell共培養(yǎng)的兩種細(xì)胞給予病理濃度的TCA干預(yù)，細(xì)胞毒性及增殖實驗、Western blo

5、t實驗以及ELISA實驗用來檢測TCA對肝細(xì)胞毒性作用、炎癥相關(guān)指標(biāo)血紅素氧合酶1(Heme oxygenase1，HO-1)和Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)的表達(dá)、肝星狀細(xì)胞增殖指標(biāo)α-平滑肌肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin，α-SMA)、一型膠原(typeⅠcollagen，CoI1A1)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transformed growth factorβ，TG

6、Fβ1)以及TLR4、HO-1水平。
　　結(jié)果：1.相比對照組，病理濃度下的TCA并沒有對HepG2細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，而TCA促進(jìn)LX-2細(xì)胞增殖。
　　2.相比對照組，50μM、100μM TCA干預(yù)HepG2細(xì)胞后，TLR4的表達(dá)顯著增加，HepG2細(xì)胞的HO-1表達(dá)水平也被TCA顯著誘導(dǎo)。
　　3.LX-2細(xì)胞被TCA干預(yù)后，CoI1A1、α-SMA、HO-1以及TLR4的表達(dá)水平較對照組顯著增加。這些結(jié)果預(yù)示T

7、CA促進(jìn)肝星狀細(xì)胞增殖可能通過上調(diào)TLR4/HO-1信號通路。
　　4.TCA對LX-2細(xì)胞的以上促增殖作用通過與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)后增強(qiáng)。共培養(yǎng)組LX-2細(xì)胞上清TGFβ1水平較LX-2細(xì)胞單獨培養(yǎng)組顯著增加。
　　結(jié)論：TCA可能通過上調(diào)TLR4/HO-1信號通路誘導(dǎo)肝細(xì)胞以及肝星狀細(xì)胞炎癥反應(yīng)，并促進(jìn)肝星狀細(xì)胞增殖，進(jìn)而加劇肝硬化的進(jìn)展。TCA不僅僅是肝硬化進(jìn)展的活性促進(jìn)因子，TCA可能成為膽汁淤積性肝病預(yù)防和治療的