?；悄懰釋Ω渭?xì)胞和肝星狀細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制.pdf

1、目的：膽汁淤積即膽汁生成或排泌發(fā)生障礙，膽汁酸在肝內(nèi)積聚使肝細(xì)胞暴露于持續(xù)升高的膽汁酸中，最終導(dǎo)致肝損傷、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞壞死。肝細(xì)胞損傷引發(fā)肝鄰近細(xì)胞(枯否細(xì)胞的激活、肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell，HSCs)以及其他炎性細(xì)胞）的招募和活化，持久反復(fù)的肝星狀細(xì)胞的激活引起以廣泛瘢痕形成以及肝結(jié)構(gòu)和功能紊亂為特征的肝纖維化、肝硬化。一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，2010年全球由于肝硬化引起死亡的人數(shù)已經(jīng)超過1百萬。因此，肝

2、硬化是全球健康醫(yī)療系統(tǒng)的一個(gè)極大負(fù)擔(dān)，絕大多數(shù)的肝硬化只能被控制，并不能被治愈。因此，找到新的危險(xiǎn)因素以及可能的治療靶點(diǎn)對于防治肝硬化以及藥物開發(fā)具有重要意義。
　　膽汁淤積是終末期肝硬化普遍的病理生理狀態(tài)，以往研究表明膽汁酸與肝硬化的進(jìn)展有關(guān)。我們團(tuán)隊(duì)也發(fā)現(xiàn)某些特定膽汁酸的組成在肝硬化患者中發(fā)生改變。本課題組前期通過超高相液相色譜質(zhì)譜連用儀(Liquid chromatography tandem mass spectromet

3、ry，LC-MS/MS)檢測了32名肝硬化患者以及27名健康志愿者的12種血清膽汁酸的濃度，結(jié)果顯示牛磺膽酸(Taurocholic acid，TCA)、甘氨膽酸(Glycocholic acid，GCA)、?；敲撗跄懰幔═aurochenodeoxycholic acid，TCDCA）發(fā)生顯著改變，這三種差異膽汁酸在肝硬化患者血清中明顯增加，其中TCA升高最顯著。此外，肝硬化患者血清TCA水平與肝硬化嚴(yán)重程度評價(jià)指標(biāo)——Child-P

4、ugh正相關(guān)。然而這些特定膽汁酸在促進(jìn)肝硬化的機(jī)制并不清楚，因此，本研究通過細(xì)胞及分子學(xué)研究模擬肝硬化狀態(tài)下的體內(nèi)微環(huán)境，旨在探究TCA對肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：肝星狀細(xì)胞系LX-2以及肝細(xì)胞系HepG2的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用來探究?；悄懰釋Ω渭?xì)胞、肝星狀細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制。分別對LX-2細(xì)胞、HepG2細(xì)胞以及Tranwell共培養(yǎng)的兩種細(xì)胞給予病理濃度的TCA干預(yù)，細(xì)胞毒性及增殖實(shí)驗(yàn)、Western blo

5、t實(shí)驗(yàn)以及ELISA實(shí)驗(yàn)用來檢測TCA對肝細(xì)胞毒性作用、炎癥相關(guān)指標(biāo)血紅素氧合酶1(Heme oxygenase1，HO-1)和Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)的表達(dá)、肝星狀細(xì)胞增殖指標(biāo)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin，α-SMA)、一型膠原(typeⅠcollagen，CoI1A1)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transformed growth factorβ，TG

6、Fβ1)以及TLR4、HO-1水平。
　　結(jié)果：1.相比對照組，病理濃度下的TCA并沒有對HepG2細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，而TCA促進(jìn)LX-2細(xì)胞增殖。
　　2.相比對照組，50μM、100μM TCA干預(yù)HepG2細(xì)胞后，TLR4的表達(dá)顯著增加，HepG2細(xì)胞的HO-1表達(dá)水平也被TCA顯著誘導(dǎo)。
　　3.LX-2細(xì)胞被TCA干預(yù)后，CoI1A1、α-SMA、HO-1以及TLR4的表達(dá)水平較對照組顯著增加。這些結(jié)果預(yù)示T

7、CA促進(jìn)肝星狀細(xì)胞增殖可能通過上調(diào)TLR4/HO-1信號(hào)通路。
　　4.TCA對LX-2細(xì)胞的以上促增殖作用通過與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)后增強(qiáng)。共培養(yǎng)組LX-2細(xì)胞上清TGFβ1水平較LX-2細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組顯著增加。
　　結(jié)論：TCA可能通過上調(diào)TLR4/HO-1信號(hào)通路誘導(dǎo)肝細(xì)胞以及肝星狀細(xì)胞炎癥反應(yīng)，并促進(jìn)肝星狀細(xì)胞增殖，進(jìn)而加劇肝硬化的進(jìn)展。TCA不僅僅是肝硬化進(jìn)展的活性促進(jìn)因子，TCA可能成為膽汁淤積性肝病預(yù)防和治療的