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文檔簡介
1、生藥甘遂是大戟科(Euphorbiaceae)植物甘遂(Euphorbia kansuiL.)的干燥塊根,主要分布在中國的陜西、山西、寧夏等地。甘遂始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,味苦,性寒,有毒,有泄水逐飲的功效?,F(xiàn)代研究表明甘遂有瀉下、引產(chǎn)、鎮(zhèn)痛、免疫抑制、抗腫瘤等作用。
目前,甘遂的各種常用溶劑提取物的抗腫瘤活性試驗研究表明,乙酸乙酯部位有強的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性,但是甘遂中單體化合物的抗腫瘤活性效果研究較少。本實驗設(shè)計將離線二維
2、制備高效液相色譜法和實時細(xì)胞監(jiān)測分析系統(tǒng)結(jié)合,進行生物活性指導(dǎo)下甘遂乙酸乙酯提取物的分離純化,試圖尋找具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的單體化合物,為闡明甘遂抗腫瘤作用的機制提供理論基礎(chǔ)。
一維分離采用工業(yè)制備液相色譜技術(shù),以硅膠作為填料,共分離出7個組分。采用 iCELLigenc RTCA系統(tǒng)對各組分分別進行抗肺癌和肝癌活性篩選,選取其中抑制活性較強的4號和6號組分進行二維分離。經(jīng)試驗對比,確定4號組分采用反相C18色譜柱進行二維分離
3、,6號組分采用正相Amide色譜柱進行二維分離。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)分析并與已有文獻對照,確定8個單體化合物的結(jié)構(gòu)分別為esulone A(1)、甘遂萜酯A(2)、(3β,11β)-3,11-dihydroxylanosta-8,24-dien-7-one(3),甘遂萜酯 E(4)、甘遂萜酯 B(5)、異東莨菪素(6)、甘遂萜酯 D(7)、甘遂萜酯 G(8),其中化合物1為從該種植物中首次分離得到。生物活性實驗表明,對肺癌細(xì)胞(A549)增殖均有
4、一定的抑制作用,其中化合物1,2,3,7和8抑制作用較明顯,并且化合物8還具有抑制肝癌細(xì)胞(Hep-G2)增殖活性。
本文還進行了甘遂萜酯 A和甘遂萜酯B的初步藥效學(xué)試驗,結(jié)果表明,兩種化合物分別在11.11 mg/kg和99.99 mg/kg時的抑瘤效果與陽性藥物環(huán)磷酰胺相似,且隨著劑量增加抑制作用增強,為進一步研究其作用機制提供參考。
本實驗將二維高效液相色譜法和實時細(xì)胞監(jiān)測系統(tǒng)結(jié)合,大大縮短試驗周期,為中藥復(fù)雜
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