太湖水華藍(lán)藻中藻藍(lán)蛋白的富集分離.pdf

1、太湖水華藍(lán)藻主要由銅綠微囊藻、水華魚腥藻和水華束絲藻等藻類組成，是太湖流域的夏季主要污染物之一。從水華藍(lán)藻中提取蛋白質(zhì)、多糖等有價(jià)值物質(zhì)，為治理提供了一條變廢為寶、提高綜合治理效益的新的有效途徑。藻藍(lán)蛋白是藍(lán)藻捕光色素復(fù)合體中重要的成分之一，可作為天然色素、熒光標(biāo)記物，還具有一定的藥用價(jià)值。
　　 本論文以太湖水華藍(lán)藻為對(duì)象，以其中的藻藍(lán)蛋白為提取目標(biāo)，系統(tǒng)研究了富集分離過(guò)程，主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 1.采用單因素掃描

2、和全因子設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化方法獲得薄層層析微囊藻毒素MC-LR、MC-RR的展開(kāi)劑體系，溶劑比例為三氯甲烷:甲醇:水=65:25:2。MC-LR、MC-RR的展開(kāi)斑點(diǎn)通過(guò)碘蒸氣顯色的目測(cè)檢出最低濃度為1mg·L-1。薄層色譜掃描法檢出的MC-LR、MC-RR最低濃度為0.001mg·L-1。MC-LR、MC-RR的色譜掃描峰面積與其濃度在0.05-10mg·L-1濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，檢測(cè)準(zhǔn)確度達(dá)95%以上。
　　 2.破碎藍(lán)藻細(xì)胞

3、的最適方法為反復(fù)凍融法，所需的最佳條件為:每0.1 g藍(lán)藻細(xì)胞(干重)加15 mL水，于-20℃和37℃間反復(fù)凍融5次，獲得的蛋白含量為14%。蛋白沉淀的最適經(jīng)典方法為硫酸銨鹽析沉淀法，條件為兩步鹽析，破壁上清液先用20%飽和度的硫酸銨鹽析，離心取上清。然后再用60%飽和度的硫酸銨鹽析，離心取沉淀，復(fù)溶后蛋白得率為78.32%，光譜純度達(dá)到0.32。鹽析后的蛋白質(zhì)溶液經(jīng)薄層層析檢測(cè)出微量的微囊藻毒素MC-LR， MC-RR。