藍(lán)藻藻藍(lán)蛋白和變?cè)逅{(lán)蛋白生物合成的研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文藍(lán)藻藻藍(lán)蛋白和變?cè)逅{(lán)蛋白生物合成的研究姓名：蘇平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：環(huán)境工程指導(dǎo)教師：趙開弘20080527華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文II外吸收峰的位置在662nm左右，證明所連接的色素為PCB。在紫外光的照射下色素蛋白可以產(chǎn)生Zn熒光，證明PCB與脫輔基蛋白是正確的共價(jià)連接。根據(jù)光譜所得到的一系列的光譜參數(shù)(可見紫外吸收比、熒光量子產(chǎn)率、摩爾消光系數(shù))都顯示了色素蛋白具有天然藻膽蛋白的

2、性質(zhì)。同時(shí)我們還利用胰蛋白酶進(jìn)行色素蛋白PCB與CpcB(C155I)和PecB(C155I)的水解實(shí)驗(yàn)，水解后的色素肽的高效液相色譜與從天然魚腥藻PCC7120中所得到的CpcB和PecB水解多肽的HPLC圖譜相近，可以證明利用大腸桿菌體內(nèi)重組所得到的色素蛋白具有天然藻膽蛋白的性質(zhì)。另外，CpeS催化CpcB(C84A)和PecB(C84S)與PCB的連接時(shí)，沒有正確的產(chǎn)物生成。以上研究均表明了CpeS可以催化CpcB(C155I)、

3、PecB(C155I)、CpcB和PecB中Cys84與PCB的偶聯(lián)。參照CpeS催化CpcB(C155I)和PecB(C155I)與PCB的體外重組的最佳反應(yīng)體系，將天然的CpcB(PecB)與PCB進(jìn)行重組，得到的色素蛋白與PCBCpcB(C155I)和PCBPecB(C155I)相比，特征峰有2～3nm的紅移。研究了變?cè)逅{(lán)蛋白脫輔基蛋白ApcA、ApcB、ApcA2、ApcD、ApcF與PCB的大腸桿菌體內(nèi)重組。本研究利用雙克隆載

4、體，將脫輔基蛋白ApcA(ApcB、ApcA2、ApcD、ApcF)、裂合酶CpeS、血紅素氧化酶HO1、膽綠素還原酶PcyA在大腸桿菌中共同表達(dá)，重組后色素蛋白PCBApcA、PCBApcB、PCBApcA2、PCBApcD和PCBApcF具有特征的紫外可見吸收和熒光光譜，分別為618nm642nm、612nm640nm、622nm642nm、650nm663nm(602nm635nm)和622nm644nm。色素蛋白的酸性尿素變性實(shí)

5、驗(yàn)表明，變性后峰的位置在660～664nm左右，證明所連接的色素為PCB。在紫外光的照射下色素蛋白可以產(chǎn)生Zn熒光，證明PCB與脫輔基蛋白是正確的共價(jià)連接。根據(jù)光譜所得到的一系列的光譜參數(shù)(可見紫外吸收比、熒光量子產(chǎn)率、摩爾消光系數(shù))都顯示了色素蛋白具有天然藻膽蛋白的性質(zhì)。利用胰蛋白酶進(jìn)行色素蛋白PCBApcA和PCBApcB水解實(shí)驗(yàn)，水解后的色素肽的高效液相色譜與從天然魚腥藻PCC7120中所得到的APC水解多肽的HPLC圖譜相似，證

6、明利用大腸桿菌體內(nèi)重組所得到的色素蛋白具有天然藻膽蛋白的性質(zhì)。色素蛋白Zn電泳在紫外光的照射下可以產(chǎn)生Zn熒光，證明色素PCB與脫輔基蛋白是正確的共價(jià)連接。色素蛋白的圓二色光譜具有天然藻膽蛋白的性質(zhì)，可見區(qū)CD顯示的是與脫輔基蛋白所連接的色素的構(gòu)象，分別在350nm和600nm左右有特征的吸收峰。紫外區(qū)顯示的是色素蛋白多肽鏈的構(gòu)象，其中PCBApcA、PCBApcB、PCBApcD和PCBApcF和其他藻膽蛋白一樣是α螺旋，只有PCBA