藻藍蛋白的分離純化、酶解及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、藻藍蛋白(C-PC)是存在于藻類細胞中的光合輔助色素蛋白。它不僅可作為天然色素應(yīng)用于食品、化妝品等行業(yè)，而且能提高機體的免疫功能，清除體內(nèi)的自由基，促進動物血細胞再生，在癌癥、潰瘍等疾病的防治上亦卓有成效。本文研究了藻藍蛋白的分離純化、酶解和藻藍蛋白及其酶解物的體外抗腫瘤活性，并對其抗腫瘤機理進行了初步探討。 鈍頂螺旋藻藻粉經(jīng)反復(fù)凍融和超聲破碎處理，離心后上清液經(jīng)過鹽析、透析得到藻藍蛋白粗提液。采用羥基磷灰石(HA)兩步柱層析法

2、對粗提液分離，得到純度A620/A280>4.0的藻藍蛋白。 采用四因素、三水平正交試驗，以MTT的實驗結(jié)果為指標，優(yōu)化胰蛋白酶和胃蛋白酶對藻藍蛋白的酶解條件，得到的四個優(yōu)化酶解條件為：(A):溫度:40℃:pH:8；[胰蛋白酶]/[藻藍蛋白]:1/10；時間:60分鐘。(B)溫度：37℃；pH：8；[胰蛋白酶]/[藻藍蛋白]:1/30；時間：90分鐘。(C)：溫度：40℃；pH:3；[胃蛋白酶]/[藻藍蛋白]:1/20；時間：

3、30分鐘。(D)溫度:33℃:pH:0.5.[胃蛋白酶]/[藻藍蛋白]:1/10；時間：30分鐘。 采用MTT法研究藻藍蛋白及其酶解物對宮頸癌細胞Hela和黑色素瘤細胞B16的體外生長抑制作用。實驗表明：藻藍蛋白對腫瘤細胞的抑制作用有明顯的劑量效應(yīng)，當藻藍蛋白的濃度達到100μg/ml時，對Hela和B16的抑制率分別達到26.3％和19.1％，但對正常細胞人腎上皮細胞293T沒有明顯的影響。藻藍蛋白酶解物的抗腫瘤活性明顯高于相

4、同濃度下的藻藍蛋白。當選用酶解條件(A)時，藻藍蛋白酶解物對Hela細胞的抑制率達到43.2％，對B16細胞的抑制率為23.2％。酶解條件為(B)時，藻藍蛋白酶解物對Hela細胞的抑制率為28.3％，對B16細胞的抑制率則達到了46.4％。酶解條件為(C)時，藻藍蛋白酶解物對Hela細胞的抑制率達到45.1％，對B16細胞的抑制率為7.8％。酶解條件為(D)時，藻藍蛋白酶解物對Hela細胞的抑制率為39.8％，對B16細胞的抑制率則達到

5、45.6％。由此的出結(jié)論：不同酶解條件下得到的酶解物對不同腫瘤細胞的抑制作用有很大的差異。 用酶解條件為(B)時得到的藻藍蛋白酶解物處理B16細胞，經(jīng)Hochst33258熒光染色和比色法檢測凋亡蛋白酶Caspase-3活性，研究藻藍蛋白酶解物的抗腫瘤機理。研究發(fā)現(xiàn)，藻藍蛋白酶解物處理B16細胞24小時后，細胞發(fā)生明顯凋亡，Caspase-3活性達到最高。得出結(jié)論，藻藍蛋白及其酶解物可能是通過激活Caspase-3家族蛋白誘導腫