miR-155-5p調(diào)控骨髓間質(zhì)干細胞向胃癌間質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化的作用及機制研究.pdf

1、目的：闡明骨髓間質(zhì)干細胞（ BM-MSC）向胃癌間質(zhì)干細胞（GC-MSC）轉(zhuǎn)分化的分子調(diào)控機制，基于胃癌微環(huán)境探尋胃癌治療新靶標。
　　方法：采用免疫熒光檢測α-SMA、FAP的表達，定量PCR檢測細胞因子的表達，Transwell遷移實驗和侵襲實驗檢測胃癌細胞遷移及侵襲能力的改變，應(yīng)用克隆形成實驗和裸鼠皮下致瘤實驗檢測胃癌細胞增殖能力的改變來確定BM-MSC與 GC-MSC表型和功能的差異。通過定量 PCR檢測比較 BM-MSC

2、與 GC-MSC中miR-155-5p表達的差異。運用miR-155-5p micmis在GC-MSC中上調(diào)miR-155-5p的表達，miR-155-5p inhibitor在BM-MSC中下調(diào)miR-155-5p的表達，分析 MSC表型、功能的變化，確定miR-155-5p對 BM-MSC向GC-MSC轉(zhuǎn)分化的調(diào)控作用。采用picTar和TargetScan軟件預(yù)測和熒光報告素酶基因檢測驗證并確定miR-155-5p調(diào)控的靶基因。采

3、用靶基因干擾片段或抑制劑與miR-155-5p inhibitor共轉(zhuǎn)染BM-MSC，檢測其表型和功能的變化，闡明 miR-155-5p調(diào)控 BM-MSC向GC-MSC轉(zhuǎn)分化的分子機制。采用免疫組織化學方法分別檢測彌散型、腸型胃癌組織標本和胃炎標本MSC中靶基因的表達，分析靶基因與胃癌分型的關(guān)系。從胃癌及癌旁組織中分離培養(yǎng)出 GC-MSC與GCN-MSC，Western blot檢測靶基因的表達差異。采用靶基因抑制劑或下游效應(yīng)分子干擾片

4、段處理GC-MSC，檢測其表型和功能的改變，闡明miR-155-5p調(diào)控的相關(guān)信號分子維持GC-MSC的表型和功能的作用及機制。
　　結(jié)果：GC-MSC與BM-MSC相比，具有更強的基質(zhì)細胞活化表型和促進胃癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移的能力。miR-155-5p在GC-MSC中低表達，BM-MSC轉(zhuǎn)染miRNA-155-5p inhibitor后可獲得GC-MSC樣表型和功能，相反，運用 miR-155-5p mimics上調(diào) GC-MSC中

5、miRNA-155-5p的表達可削弱其表型和對胃癌細胞的作用。NF-kappa B p65（NF-κB p65）和inhibitor of NF-kappa B kinase subunit epsilon（ IKBKE/IKKε）被預(yù)測并驗證為 miR-155-5p的靶基因。使用si-NF-κB p65或 si-IKBKE作用于 BM-MSC可以抑制 miR-155-5p inhibitor對其轉(zhuǎn)分化的調(diào)控作用，這種作用也可以被NF-

6、κB p65活化抑制劑PDTC所抑制。IKBKE、NF-κB p65和phospho-NF-κB p65在彌散型胃癌組織MSC中的表達高于腸型胃癌組織MSC，陽性率分別為83.5％、80.8%和65.0%，而它們在胃炎組織MSC中幾乎不表達，陽性率僅為19.3%,0%和4%。miR-155-5p在GC-MSC中表達下調(diào)，而NF-κB p65表達上調(diào)且活化增加，抑制NF-κB p65的活化或其下游關(guān)鍵效應(yīng)因子的表達可以逆轉(zhuǎn)GC-MSC的表

7、型和功能。
　　結(jié)論：GC-MSC較BM-MSC具有更強的促癌表型、功能和低表達miR-155-5p。BM-MSC中miR-155-5p的低表達可上調(diào)IKBKE和NF-κB p65的表達并促進 NF-κB p65的活化，進而促進其獲得GC-MSC樣表型和功能，靶向抑制GC-MSC中NF-κB p65的活化或下游效應(yīng)因子的表達可逆轉(zhuǎn)其促癌表型和功能。為 GC-MSC在胃癌微環(huán)境中的重塑提供了新的機制，也為胃癌的治療提供了有效靶點和治