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文檔簡介
1、目的:惡性黑色素瘤(malignant melanoma, MM)是人類死亡率最高的腫瘤之一,而目前對晚期MM尚無有效的治療手段。脂氧素(Lipoxins, LXs)是一類脂氧合酶作用于花生四烯酸后的代謝產(chǎn)物,具有促進炎癥消退的作用,在多種腫瘤實驗中表現(xiàn)出抗腫瘤特性。轉化生長因子-β1(Transforming growth factor beta1, TGF-β1)是一種多功能調節(jié)生長因子,參與調控細胞的生長、分化,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展
2、有著密切關系。本實驗擬對脂氧素A4(Lipoxin A4, LXA4)和TGF-β1在體外MM的發(fā)生、發(fā)展中的作用進行初步探討。
方法:采用免疫組化SP法檢測正常皮膚和MM患者病變皮損中LXA4受體(lipoxin A4 receptor, ALX)和TGF-β1蛋白的表達水平。體外培養(yǎng)A375細胞(人惡性黑色素瘤細胞株),分組給予完全培養(yǎng)基、LXA4 factor(400nM)、TGF-β1 factor(50ng/ml)和
3、兩者共同刺激后,采用CCK8細胞增殖實驗檢測A375細胞的增殖情況,Transwell細胞侵襲實驗檢測MM細胞侵襲、轉移能力,以及流式細胞儀凋亡實驗檢測MM細胞的凋亡情況。同時,應用Western Blot實驗和qRT-PCR實驗,分別從蛋白翻譯和mRNA轉錄水平檢測A375細胞中ALX和TGF-β1的表達情況。所有實驗結果均采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析。
結果:免疫組化結果顯示,ALX、TGF-β1在MM組織中的表達
4、均顯著高于正常皮膚組織(p<0.05)。CCK-8細胞增殖實驗結果顯示,各時間點正常對照組生存率均較其余實驗組高(p<0.05)。各組Transwell實驗結果表明,TGF-β1 factor組侵襲細胞數(shù)量高于正常對照組,LXA4 factor組則低于正常對照組(p<0.05)。流式細胞儀凋亡實驗結果顯示,LXA4 factor組凋亡細胞數(shù)量明顯多于正常對照組(p<0.001)。在Western Blot實驗和qRT-PCR實驗中可以見
5、到,LXA4作用細胞后ALX轉錄和翻譯水平均較正常對照組明顯增加(p<0.05),細胞 TGF-β1轉錄和翻譯水平則均較正常對照組有下降(p<0.05);而TGF-β1作用于A375細胞后ALX轉錄和翻譯水平均較正常對照組有一定程度的下降(p>0.05),細胞 TGF-β1轉錄和翻譯水平則均較正常對照組增加(p<0.05)。
結論:LXA4、TGF-β1與MM的發(fā)生、發(fā)展具有一定程度上的相關性;LXA4一定程度上抑制了MM細胞
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