Nanog-miR-200c通路在調控結腸癌EMT轉化中的作用及其臨床病理學意義.pdf

1、目的:
　　結腸癌在癌癥致死率中高居第三位，其代表著癌癥治療的巨大挑戰(zhàn)。EMT（上皮間充質轉化）在惡性腫瘤（例如乳腺癌、結腸癌、前列腺癌）的發(fā)生機制中廣泛存在。Nanog作為重要的干性轉錄因子，其與結腸癌干細胞的干性、自我更新能力的調控密切相關。同時，miRNAs也可以維持胚胎干細胞與腫瘤細胞的干性，在EMT可塑性的調控機制方面發(fā)揮關鍵作用。本研究旨在在結腸癌中探討Nanog與miR-200c重要的相關性，Nanog是如何調節(jié)mi

2、R-200c的具體機制有待進一步研究。
　　方法及結果:
　　在臨床樣本水平，我們收集49例結腸癌患者的癌組織及其癌旁組織，通過實時定量PCR對這些組織中miR-200c與miR-141的表達水平進行檢測，分析miR-200c與miR-141在結腸癌組織中的改變情況。聯(lián)合定量miR-200c/141的表達，分析其與患者臨床病理學特征之間的相關性、在患者術后1年預后方面的意義。結果顯示:結腸癌組織中miR-200c/141表達

3、水平較其相對應的癌旁組織的表達量顯著降低。其中，miR-141表達量與腫瘤大小和淋巴結轉移存在負相關(P＜0.05)。無淋巴結轉移或臨床早期的結腸癌患者其miR-141的表達量明顯高于有淋巴結轉移或臨床晚期患者的表達量。在腫瘤大小方面，miR-200c/141的表達量與腫瘤大小之間存在明顯的相關性（P＜0.05）。但在患者術后1年的生存率方面，miR-200c/141的表達量無明顯的預后意義（P＞0.05）。在細胞學水平，對結腸癌細胞株

4、SW480和LS174T進行Nanog過表達慢病毒轉染，采用嘌呤霉素梯度篩選并建立穩(wěn)定轉染的細胞株，通過Real-time PCR和Western blot實驗觀察結腸癌細胞株Nanog過表達轉染后對miR-200c的影響，并確立兩者相關性。對結腸癌細胞HT-29和HCT116進行siRNA/Nanog干擾，并通過Real-time PCR和Western blot實驗觀察對結腸癌細胞株的Nanog表達情況的影響，以及后續(xù)對miR-20

5、0c的影響，結果顯示:進行Nanog過表達慢病毒轉染后，Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn)，SW480和LS174T細胞中Nanog表達量顯著增加，miR-200e表達量顯著降低;Western blot實驗結果顯示，過表達慢病毒轉然后SW480和LS174T細胞中Nanog表達量顯著高于未轉染及轉染對照病毒的SW480和LS174T細胞。對Nanog干擾實驗結果顯示:結腸癌細胞株中Nanog表達量顯著下降，而miR-200c的表達量呈

6、上升趨勢。Real-time PCR和Western blot聯(lián)合檢測發(fā)現(xiàn)，Nanog和miR-200c呈負相關(P＜0.05）。
　　結論:
　　在結腸癌組織樣本中表達下調的miR-200c/141與腫瘤大小，淋巴結轉移、臨床分期等相關。在細胞學水平，Nanog過表達慢病毒轉染后SW480和LS174T中miR-200c表達量下降，Nanog干擾后HT29和HCT116細胞中miR-200c的表達量增加，因此，Nanog與