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文檔簡介
1、第一部分:二十碳五烯酸玻璃體內(nèi)注射對兔眼視覺誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜電圖的影響
目的:前期研究已證實玻璃體內(nèi)注射二十碳五烯酸(EPA)濃度0.01g/L時可延緩糖尿病性視網(wǎng)膜病變的進展,對視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞有保護作用,此實驗擬驗證不同濃度 EPA玻璃體內(nèi)注射對視覺誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜電圖的影響,確定前述EPA治療濃度是否安全,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
方法:24只新西蘭白兔隨機分為4組,每組6只(12只眼),右眼為實驗眼,玻璃體內(nèi)分
2、別注射0.01mg(0.1ml)、0.1mg(0.1ml)、1.0mg(0.1ml)EPA及0.1%DMSO(0.1ml),左眼為對照眼,玻璃體內(nèi)注射0.1ml生理鹽水。注射后第1、3、7、14天行雙眼視覺誘發(fā)電位(VEP)檢查,記錄不同視角P100潛伏期的變化,及視網(wǎng)膜電圖(ERG)檢查,記錄視桿細(xì)胞反應(yīng)(Rod-R)及最大混合反應(yīng)(Max-R)b波振幅的變化,應(yīng)用SPSS軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。
結(jié)果:0.01mg、0.
3、1mg、1.0mgEPA及0.1%DMSO的實驗組(各6只眼)分別與對照組(各6只眼)各時間點1°視角及30′視角視覺誘發(fā)電位P100潛伏期及視網(wǎng)膜電圖Rod-R及Max-R的b波振幅均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
第二部分:兔眼玻璃體內(nèi)注射二十碳五烯酸的藥代動力學(xué)過程
目的:研究玻璃體內(nèi)注射 EPA的藥代動力學(xué)過程,為臨床給藥周期提供理論依據(jù)。
方法:新西蘭白兔30只,雌雄不限,體重2.5-3.0kg,
4、隨機分為標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)控組3只及實驗組27只兔。實驗組再隨機分為9組,每組3只。標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)控組動物無需手術(shù)操作,用于制備空白及質(zhì)控玻璃體樣品;實驗組動物前房穿刺抽取適量房水后,玻璃體內(nèi)注射EPA0.1ml(EPA濃度為0.01mg/0.1ml)。分別于玻璃體內(nèi)注藥后5、30、90、150、240、390、510、690、720min處死動物,立即摘取雙側(cè)眼球制備玻璃體樣本。應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS/MS)檢測玻璃體內(nèi)EPA
5、濃度。用DAS軟件計算主要的藥代動力學(xué)參數(shù)。
結(jié)果:本實驗條件 EPA與內(nèi)標(biāo)(格列喹酮)峰形良好,空白玻璃體的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾二者測定。EPA保留時間為1.94min左右,內(nèi)標(biāo)的保留時間為0.75min左右。兔眼玻璃體注入 EPA后體內(nèi)過程符合有滯后時間的二室模型。EPA的濃度在0.0200~5.00μg/g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r)在0.9972~0.9981之間,典型回歸方程為:Y=0.405×C+0.00152(
6、r=0.9972,n=8)。低、中、高三個濃度水平質(zhì)控(QC)樣品的提取回收率分別為(105.6±6.9)%、(102.3±2.3)%和(94.6±2.1)%。內(nèi)標(biāo)的提取回收率為(91.6±3.6)%。定量下限(LLOQ)及低、中、高3個濃度水平的QC樣品日內(nèi)RSD分別為10.7%、7.0%、2.1%和2.2%,日間RSD分別為14.0%、11.6%、5.2%和4.1%,準(zhǔn)確度分別為96.0%、97.9%、96.6%和102.7%。EP
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