PQ-LRP基因沉默對犬小孢子菌生長及毒力的影響及手術(shù)治療皮膚淋巴細(xì)胞浸潤癥1例.pdf

1、本文主要從以下幾方面論述：
　　第一部分 PQ-LRP基因沉默對犬小孢子菌生長及毒力的影響
　　目的:
　　1.觀察犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默前后形態(tài)學(xué)區(qū)別。
　　2.觀察不同濃度L-半胱氨酸對PQ-LRP基因表達(dá)的影響。
　　3.通過建立豚鼠感染模型評估犬小孢子菌沉默前后致病力強(qiáng)弱。
　　4.探討PQ-LRP基因?qū)θ℃咦泳L及毒力的影響。
　　方法:
　　1.犬小孢子菌野生株、干

2、擾株分別于25℃SDA(Sabouraud's medium，沙氏瓊脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)。
　　2.犬小孢子菌野生株、干擾株分別于25℃米飯培養(yǎng)基培養(yǎng)，行真菌鏡檢觀察大分生孢子形態(tài)變化，SEM(Scanning electron microscope，掃描電子顯微鏡)和TEM(Transmission electron microscope，掃描電子顯微鏡)觀察其超微結(jié)構(gòu)。
　　3.犬小孢子菌野生株肉芽腫及體癬株、干

3、擾株肉芽腫及體癬株分別感染豚鼠背部皮膚，肉眼觀察皮損變化情況并取部分皮屑及毛發(fā)組織進(jìn)行真菌鏡檢觀察發(fā)內(nèi)及發(fā)外孢子。
　　4.犬小孢子菌野生株、干擾株25℃行常規(guī)沙氏液體培養(yǎng)基培養(yǎng)并分別分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組:0ug/mL，2 ug/mL，200 ug/mL濃度L-半胱氨酸組，培養(yǎng)10天后，采用RT-PCR測定PQ-LRP基因沉默前后mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.菌落形態(tài):犬小孢子菌野生株、干擾株25℃培養(yǎng)8天和16

4、天后，干擾株較野生株生長受限，主要表現(xiàn)為菌落直徑較小、氣中菌絲少，粉末較多、皺褶少、色素變淺;而菌落生長速度兩者無明顯變化。
　　2.真菌鏡檢大分生孢子結(jié)構(gòu):犬小孢子菌干擾株的大分生孢子形態(tài)有明顯變化，大小不一，形狀不規(guī)律、有彎曲;孢子壁粗糙、有皺褶、不完整;分隔不規(guī)律、減少、部分缺如;細(xì)胞內(nèi)容不均勻、濃縮、空泡化、缺失。
　　3.SEM:犬小孢子菌野生株大分生孢子和小分生孢子飽滿、形狀規(guī)則，菌絲圓潤、粗細(xì)均勻。干擾株的大分

5、生孢子形態(tài)有變化、主要表現(xiàn)彎曲、不飽滿、甚至破壁，可見孢子內(nèi)容空如;小分生孢子皺縮;菌絲不飽滿、扁平、粗細(xì)不均和扭曲。
　　4.TEM:犬小孢子菌野生株大分生孢子孢壁光滑，細(xì)胞內(nèi)容豐滿，可見細(xì)胞核、細(xì)胞器。干擾株的大分生孢子較干擾前有明顯變化、主要表現(xiàn)細(xì)胞壁增厚、不光滑、壁破、內(nèi)容流出、細(xì)胞核及細(xì)胞器減少、甚至缺如。
　　5.豚鼠模型:犬小孢子菌干擾株較野生株不易感染宿主;致病豚鼠毛發(fā)皮屑真菌鏡檢:犬小孢子菌野生株為發(fā)內(nèi)外孢

6、子，孢子多，菌絲粗細(xì)均勻，干擾株為發(fā)外孢子，孢子少，菌絲粗細(xì)不一、彎曲不自然;豚鼠模型:犬小孢子菌野生株真皮及皮下組織見感染性肉芽腫改變，干擾株感染性肉芽腫改變不明顯。
　　6.半胱氨酸對犬小孢子菌PQ-LRP基因影響:犬小孢子菌野生株隨半胱氨酸的濃度增加PQ-LRP基因表達(dá)水平呈上升趨勢，干擾株P(guān)Q-LRP基因表達(dá)水平無規(guī)律性。
　　結(jié)論:
　　PQ-LRP基因抑制后犬小孢子菌形態(tài)有變化、毒力減弱，推測PQ-LRP基