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文檔簡介
1、氣單胞菌是導致水產養(yǎng)殖動物感染疾病的重要病原菌,對淡水養(yǎng)殖業(yè)造成了非常大的經濟損失。論文基于前期對安徽地區(qū)出血性病魚樣本中氣單胞菌的分離鑒定的基礎上,檢測了8個毒力基因在氣單胞菌體內的分布情況,并研究了環(huán)境因子(溫度、pH值、鹽度)對氣單胞菌生長及其毒力基因表達的影響。研究結果有助于了解氣單胞菌中毒力基因的分布以及闡明環(huán)境因子影響氣單胞菌感染疾病的發(fā)生機理,以期提供有效的生態(tài)學防治措施,對提高水產食品安全性以及促進水產養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)
2、展提供理論支撐。
1.毒力基因的檢測:將從各類病魚體內分離鑒定出的氣單胞菌接種培養(yǎng)并提取DNA,根據(jù)GenBank中已登錄的氣單胞菌核苷酸序列,設計并合成了八對特異性引物,包括氣溶素基因Aer,彈性蛋白酶基因Ahy-B,細胞毒性腸毒素基因Act,細胞興奮性腸毒素基因Alt,溫敏胞外蛋白酶基因Epr,熱穩(wěn)定腸毒素基因Ast,脂肪酶基因Lip,彈性蛋白酶基因Ela,通過PCR技術,擴增各類基因片段,通過瓊脂糖凝膠實驗檢測電泳結果,
3、結果顯示58株氣單胞菌中,含Epr基因的占34.5%(20/58),含Alt基因的占24.1%(14/58),含Lip基因的占75.9%(44/58),含Act基因的占81%(47/58),含Ela基因的占62%(36/58),含AhyB基因的占62%(36/58),含Ast基因的占34.5%(20/58),含Aer基因的占41.4%(24/58);對應每種毒力基因,選擇一株結果為陽性的菌株,結果為:①.Aer-47;②.Ela-47;
4、③.Ahy-B-35;④.Act-56;⑤.Lip-17;⑥.Epr-17;⑦.Ast-17;⑧.Alt-50,共計5株。
2.五株菌株生長曲線的測定:為了了解氣單胞菌的生長情況,對上一章篩選出的5株菌株進行了生長曲線的測定。環(huán)境因子包括pH值、鹽度以及溫度,通過測定OD值以及采用活菌平板計數(shù)法,掌握了待測菌株的生長狀況。在pH這一影響因子方面,氣單胞菌在中性環(huán)境中生長能力最強,其次是酸性環(huán)境,對堿性環(huán)境的耐受性最差;在鹽度方
5、面,除了35號菌株受鹽度升高抑制最為明顯外,其他4株菌隨著鹽度的增加,其生長是逐漸受到抑制的;而在溫度方面,低溫對嗜水氣單胞菌的影響明顯,15℃時細菌生長較為緩慢,而當溫度由15℃逐漸升高至35℃左右時,細菌的生長也開始加快。
3.環(huán)境因子對毒力基因表達的影響:研究環(huán)境因子對氣單胞菌毒力基因表達的影響,對深入了解氣單胞菌的致病機理非常重要,通過設置pH值、鹽度以及溫度這三個環(huán)境因子以達到了解其機理的目的。由生長曲線圖可以了解曲
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