BDV感染大鼠皮層神經(jīng)元的mRNA內(nèi)參篩選.pdf

1、背景:博爾納病毒（BDV）是博爾納病的病原體，得名于一種地方性馬腦脊髓流行病，這種流行病爆發(fā)于19世紀(jì)末臨近德國(guó)薩克森城市博爾納鎮(zhèn)的馬匹中。BDV是一種嗜神經(jīng)、非細(xì)胞裂解、非分節(jié)段和歸類于單股反鏈病毒目的RNA病毒。BDV全基因組全長(zhǎng)大約8.9kb，包含6個(gè)主要開(kāi)放閱讀框。這種嗜神經(jīng) RNA病毒能感染包括人在內(nèi)的多種脊椎動(dòng)物[1]。如今，BDV感染在包括中國(guó)[2,3]在內(nèi)的全球各地的多種動(dòng)物感染[4]中被報(bào)道。感染的宿主廣泛的患有神經(jīng)紊

2、亂癥狀，從免疫介導(dǎo)性疾病到非炎癥的行為異常障礙[5]。新生感染大鼠會(huì)出現(xiàn)學(xué)習(xí)障礙、情感和行為異常。這種類似于人精神疾病的癥狀可作為因持續(xù)病毒感染引起人的大腦功能、形態(tài)學(xué)和行為的研究理想模型[6]。
　　BDV的致病機(jī)制尚且不完全清楚[7]。當(dāng)研究BDV感染模型的分子生物學(xué)時(shí)，RT-qPCR是應(yīng)用于基因表達(dá)的最普遍技術(shù)之一。篩選穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因是正確評(píng)估基因表達(dá)的一個(gè)必要條件。
　　目的:本研究的目的在于從BDV感染的大鼠大

3、腦皮層神經(jīng)元中篩選出最穩(wěn)定的內(nèi)參基因。
　　方法:體外感染BDV的新生大鼠皮層神經(jīng)元中，在常用管家基因中運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR定量mRNA表達(dá)，篩選合適內(nèi)參基因。在培養(yǎng)正常神經(jīng)元和BDV感染的神經(jīng)元12天后，平行分析8個(gè)常用內(nèi)參基因的表達(dá)。內(nèi)參基因用 RT-qPCR驗(yàn)證后通過(guò)4種統(tǒng)計(jì)方法 geNorm, NormFinder,BestKeeper,和△-Ct排序之后，運(yùn)用RankAggregpackage生成最終排序結(jié)果。

4、　　結(jié)果：四種統(tǒng)計(jì)方法產(chǎn)生不同的結(jié)果，geNorm排序 GAPDH&YWHAZ為第一穩(wěn)定的內(nèi)參基因，NormFinder和△-Ct排序 ACTB為第一， BestKeeper排序ppIA為第一。RankAggreg package最終確定ACTB為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因。
　　結(jié)論:本研究首次通過(guò)在BDV感染的大鼠皮層神經(jīng)元中，運(yùn)用PCR定量mRNA表達(dá)來(lái)篩選內(nèi)參基因。在神經(jīng)元感染BDV12天后，ACTB被定為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因。通過(guò)這種