NADH對(duì)癲癇大鼠內(nèi)嗅皮層神經(jīng)元GABAA受體功能的作用.pdf

1、癲癇（epilepsy）是神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的疾病之一，我國(guó)擁有約900萬(wàn)癲癇患者。癲癇的治療首選是藥物治療，但同時(shí)約有1/3的患者對(duì)多種藥物治療效果不佳，成為難治性癲癇患者。難治性癲癇患者服用了能耐受的最大劑量，血藥濃度也達(dá)到有效范圍，但仍然無(wú)法控制癲癇發(fā)作，影響他們的日常生活。
　　癲癇發(fā)病機(jī)制不詳，但癲癇是由神經(jīng)元異常放電所致的理論則得到廣泛認(rèn)同。癲癇病人發(fā)作間期存在低葡萄糖代謝，而癲癇發(fā)作時(shí)正電子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像（PET）

2、圖像則表現(xiàn)為高代謝灶，提示癲癇的發(fā)作可能與糖代謝有關(guān)。GABAA受體功能異常被公認(rèn)為癲癇發(fā)病的重要機(jī)制，其中α1亞基磷酸化對(duì)于維持GABAA受體功能有決定作用。GABAA受體α1亞基磷酸化依賴(lài)于，在Pi、NAD+、NADH、G-3-P存在條件下的GAPDH的糖酵解功能。因此糖代謝與癲癇的發(fā)病有著密切的聯(lián)系，特別是NADH可能會(huì)通過(guò)對(duì)GABAA受體功能的調(diào)控，影響癲癇的發(fā)作。鋰-匹魯卡品大鼠模型的致癇鼠可出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作(SRS)，腦電

3、圖表現(xiàn)與人類(lèi)癲癇持續(xù)狀態(tài)十分類(lèi)似，各種抗癲癇藥物均可對(duì)抗此癲癇發(fā)作，被認(rèn)為是具有與人類(lèi)顳葉癲癇相似特征的致癇鼠模型。在癲癇動(dòng)物模型中，鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇動(dòng)物模型是一種比較理想的公認(rèn)的邊緣系統(tǒng)癲癇動(dòng)物模型，我們給予大鼠腹腔注射鋰-匹魯卡品建立急性癲癇模型。
　　目的介紹建立氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠模型的方法,并且通過(guò)全細(xì)胞膜片鉗記錄,首先初步研究致癇大鼠內(nèi)嗅皮層神經(jīng)元GABAA受體功能。其次，NADH作為供氫體可參與體內(nèi)多種代謝反

4、應(yīng)，研究其會(huì)對(duì)GABAA受體功能有何影響，理清神經(jīng)元能量代謝狀況對(duì)GABAA受體功能的影響。探討并豐富癲癇可能的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療癲癇提供新的思路和方法。
　　方法實(shí)驗(yàn)一：將30只Spraque-Dawley（SD）大鼠隨機(jī)分為癲癇模型組（20只）和生理鹽水對(duì)照組（10只）。癲癇模型組大鼠先后腹腔注射氯化鋰和匹羅卡品。大鼠癲癇發(fā)作癥狀采用Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。點(diǎn)燃出現(xiàn)RacineⅣ級(jí)以上并存活者人組。對(duì)照組予以相同體積的生理鹽水

5、腹腔注射。將大鼠在麻醉下，迅速斷頭取腦，并用振動(dòng)切片機(jī)切得6至8片內(nèi)嗅皮層腦片。在電壓鉗Gapfree模式下記錄。全細(xì)胞記錄GABAA受體電流，每2min給藥10sec，持續(xù)12min。L
　　實(shí)驗(yàn)二：將45只SD大鼠隨機(jī)分為NADH組（15只）、不干預(yù)組（15只）和對(duì)照組（15只）。所有大鼠先后腹腔注射氯化鋰和匹羅卡品。造模，取腦，制取腦片和電生理記錄同實(shí)驗(yàn)一。各組都通過(guò)電極內(nèi)液給藥。NADH組的內(nèi)液加入NADH；對(duì)照組的普通內(nèi)

6、液加入OkadaicAcid。
　　結(jié)果實(shí)驗(yàn)一：可見(jiàn)癲癇組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞的GABAA受體電流隨時(shí)間的衰減非常明顯，而生理鹽水組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞的GABAA受體電流隨時(shí)間的衰減不明顯。在標(biāo)準(zhǔn)記錄條件下，我們將20組模型組數(shù)據(jù)和20組對(duì)照組數(shù)據(jù)列入了統(tǒng)計(jì)范圍進(jìn)行比較。模型組的GABAA受體電流隨時(shí)間的衰減幅度較后者明顯加劇。時(shí)間是有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的(P<0.05)，分組的作用也是有差異的(P<0.001)，時(shí)間和分組還存在交互作用；固定時(shí)間

7、，對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的處理組和對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)，分組都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　實(shí)驗(yàn)二：可見(jiàn)不干預(yù)組和對(duì)照組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞的GABAA受體電流隨時(shí)間的衰減非常明顯，而NADH組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞的GABAA受體電流隨時(shí)間的衰減相對(duì)不明顯。在標(biāo)準(zhǔn)記錄條件下，我們將20組NADH組數(shù)據(jù)、20組不干預(yù)組數(shù)據(jù)和20組對(duì)照組數(shù)據(jù)列入了統(tǒng)計(jì)范圍進(jìn)行比較。NADH組的GABAA受體電流隨時(shí)間的衰減幅度較其它兩組明顯減輕。時(shí)間是有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的

8、(P<0.05)，分組的作用也是有差異的(P<0.001)，時(shí)間和分組還存在交互作用；固定時(shí)間，對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的處理組和對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)，分組都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　結(jié)論鋰-匹魯卡品癲癇模型的致癇鼠可出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作。其機(jī)制尚不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)中癲癇組大鼠GABAA受體電流衰減趨勢(shì)較正常組的增強(qiáng)，說(shuō)明此模型可使GABAA受體功能受損。提示：GABAA受體功能受損可能是鋰-匹魯卡品致癇的電生理機(jī)制所在。