集胞藻PCC6803中sll1466的基因工程研究.pdf

1、藍(lán)藻是一類能進(jìn)行植物型產(chǎn)氧光合作用的原核生物，集胞藻（Synechocystis sp. PCC6803）是一種具有自然轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的單細(xì)胞藍(lán)藻，它既能利用光能進(jìn)行自養(yǎng)生長，也可利用葡萄糖進(jìn)行異養(yǎng)生長，是光合作用分子生物學(xué)研究的重要模式之一，藍(lán)藻的分子遺傳學(xué)研究也得到了廣泛的運(yùn)用。
　　 基因敲除和基因調(diào)控平臺的建立。在集胞藻（Synechocystis sp. PCC6803）選取與藍(lán)藻藻膽體核基因apcE有相互作用，但功能未知的

2、sll1466基因，通過分子生物學(xué)方法，從集胞藻PCC6803總DNA中調(diào)取sll1466基因片段，將sll1466基因片段完全切除并替換成卡那霉素（kanaamycin，簡稱Kana）抗性基因片段，通過自然轉(zhuǎn)化的方法將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入集胞藻PCC6803，利用抗性篩選得到同源重組成功的陽性轉(zhuǎn)化子。
　　 對⊿sll1466突變株在不同的培養(yǎng)條件下進(jìn)行較系統(tǒng)的研究，測定突變株與野生株的生長曲線、藻膽蛋白含量、葉綠素a含量、光合放

3、氧速率等相關(guān)生理指標(biāo)，并輔助光譜分析。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在光強(qiáng)5000 Lux下，⊿sll1466突變株的生長速率明顯低于野生型，而在光強(qiáng)為500 Lux下，⊿sll1466突變株的生長速率卻高于野生型?；旌蠣I養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)，野生型的生長優(yōu)于⊿sll1466突變株。缺Fe、N、P、Cu、CO32-元素培養(yǎng)時(shí)，突變株和野生型并沒有表現(xiàn)出很大的差異性，突變株在鹽脅迫條件下耐受性低于野生型。綜上所述可推測sll1466基因被敲除后，影響