12728.集胞藻pcc6803多不飽和脂肪酸生物合成關(guān)鍵酶復(fù)合體的研究_第1頁
已閱讀1頁,還剩70頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、集胞藻集胞藻PCC6803多不飽和多不飽和脂肪酸脂肪酸生物合成生物合成關(guān)鍵酶復(fù)合體的研究關(guān)鍵酶復(fù)合體的研究ProteincomplexesrelatedtopolyunsaturatedfattyacidbiosynthesisinSynechocystissp.PCC6803領(lǐng)域:生物工程研究生:巫琴指導(dǎo)教師:張衛(wèi)文教授企業(yè)導(dǎo)師:王冰高級研究員天津大學(xué)化工學(xué)院二零一四年五月摘要細胞的代謝活動依賴于胞內(nèi)各種蛋白質(zhì)的活性,而胞內(nèi)蛋白質(zhì)大多

2、是以蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式存在。蛋白質(zhì)復(fù)合體在諸如生物催化、轉(zhuǎn)運、信號傳導(dǎo)、免疫、細胞調(diào)控等多種生命過程起著重要的作用。目前,對藍藻中多不飽和脂肪酸相關(guān)代謝和調(diào)控途徑的蛋白質(zhì)作用機制的知識十分缺失,限制了將這類高效代謝和調(diào)控模塊用于大幅度提高多不飽和脂肪酸產(chǎn)量的各種努力。為了大規(guī)模合成這種重要的高附加值生物產(chǎn)品,我們在集胞藻PCC6803中發(fā)展蛋白質(zhì)復(fù)合體分析技術(shù),并利用這一技術(shù)進一步發(fā)現(xiàn)和鑒定多不飽和脂肪酸生物合成關(guān)鍵酶復(fù)合體的重要功能化

3、伴侶蛋白,以完善對相關(guān)生物功能模塊的認識。我們的科學(xué)研究假說是這些和重要脂肪酸合成酶共存于同一蛋白復(fù)合體中的功能伴侶蛋白也可能有著重要的生物學(xué)功能。在本文中,首先選取了與多不飽和脂肪酸合成相關(guān)的slr1609、sll0617、slr1137三個基因,通過在集胞藻PCC6803中構(gòu)建含有3FLAG尾部的重組蛋白質(zhì),實現(xiàn)了選定的脂肪酸關(guān)鍵合成酶的突變重組,突變體經(jīng)測序驗證均正確。然后,從中挑選出在脂肪酸代謝中起樞紐作用的脂肪酸激活酶基因sl

4、r1609的突變株作為研究對象,利用RTqPCR技術(shù)優(yōu)化了重組蛋白表達條件,并通過SDSPAGE和Western雜交,對3FLAG標記的slr1609突變株進行了鑒定。根據(jù)slr1609的亞細胞定位,分別提取全細胞與細胞質(zhì)中的蛋白質(zhì),利用標簽標記親和純化技術(shù)分離純化出蛋白質(zhì)復(fù)合體,并通過NativePAGE初步驗證了蛋白質(zhì)復(fù)合體的存在。最后,利用LCMSMS分別鑒定了slr1609突變株的全細胞和細胞質(zhì)中目標蛋白質(zhì)復(fù)合體成分,質(zhì)譜結(jié)果表

5、明目標蛋白能正常表達且被純化,同時我們獲得了三個可能與脂肪酸代謝有關(guān)的未知功能蛋白——Sll0350、Ssl1707和Sll0981,對于鑒定到的蛋白質(zhì)仍需進一步的實驗的驗證來提供更有力的證據(jù),利用分子生物學(xué)手段和組學(xué)手段對有效候選伴侶蛋白進行功能研究。本研究一方面立足于建立重要的分析方法,另一方面對有著重要合成生物學(xué)應(yīng)用價值的藍細菌脂肪酸合成途徑進行研究,研究手段和結(jié)果具有很高的創(chuàng)新性。對脂肪酸代謝途徑的研究將有利于對這一途徑相關(guān)產(chǎn)品

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論