利用COⅠ和Cytb分析青南地區(qū)棘球絳蟲分離株基因型及其蛋白質(zhì)表達(dá)Western-blot初步分析.pdf

1、目的：
　　1.運(yùn)用棘球絳蟲線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞單位Ⅰ(COⅠ)基因及線粒體細(xì)胞色素B(Cyt B)基因?qū)η嗪Ｊ≈虚g宿主體內(nèi)棘球絳蟲行基因多態(tài)性分析，確定青海省棘球絳蟲基因型。
　　2.初步分析棘球蚴與泡球蚴的蛋白表達(dá)差異，為包蟲病診斷抗原、候選疫苗抗原、藥物作用靶分子抗原的分離、鑒定提供理論依據(jù)。方法1.利用適合的DNA分析軟件對40條不同中間宿主體內(nèi)的棘球絳蟲（14條人體分離株、21條羊肝分離株、5條羊肺分離株）CO

2、Ⅰ基因及43條人體分離株Cyt B基因行同源性、堿基組成性分析并計算序列間的遺傳距離，繪制細(xì)粒棘球絳蟲的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖，構(gòu)建NJ樹與Bayesian樹。
　　3.以分離的不同人體細(xì)粒棘球蚴的囊壁、囊液、原頭節(jié)及泡球蚴粗提取蛋白為抗原，采用SDS-PAGE方法分析細(xì)粒棘球蚴不同人體分離株的蛋白表達(dá)，用已確診包蟲病患者血清作為一抗，采用Western-blot方法分析兩型棘球絳蟲的特異性蛋白。
　　結(jié)果：
　　1.基于COⅠ

3、基因及CytB基因成功構(gòu)建棘球絳蟲單倍型網(wǎng)絡(luò)圖及系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　2.在816個COⅠ基因核苷酸位點(diǎn)中，241個可變位點(diǎn)，149個簡約信息位點(diǎn)。A、T、C、G堿基頻率分別為0.163、0.491、0.103、0.242。所有序列平均遺傳距離為0.068，豬帶絳蟲和CH3之間遺傳距離最大0.204。
　　3.人體分離株CytB基因的541個核苷酸序列，211個可變位點(diǎn)，127個簡約信息位點(diǎn)。堿基頻率：A=0.191，C=0.1

4、01，G=0.24，T=0.468。所有序列平均遺傳距離為0.054，豬帶絳蟲和CH14、ZH22之間遺傳距離為0.311。
　　4.不同人體細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)蛋白條帶豐富，囊壁和囊液蛋白無明顯差異，117KD、49KD、34KD附近均出現(xiàn)較亮的特異性條帶。
　　5.泡球蚴蛋白在72KD、55KD、26KD附近出現(xiàn)濃集條帶，Western-blot分析結(jié)果示：55KD和26KD附近出現(xiàn)特異性條帶。
　　結(jié)論：
　　

5、1.基于COⅠ基因及CytB基因分析不同中間宿主體內(nèi)的棘球絳蟲分離株，共鑒定兩種蟲體，分別為細(xì)粒棘球絳蟲與多房棘球絳蟲。
　　2.細(xì)粒棘球絳蟲均為G1基因型，用于分析的單倍體型在NJ樹與Bayesian樹中呈現(xiàn)梳齒狀，存在種內(nèi)突變。
　　3.CH14為青藏高原的優(yōu)勢單倍型。
　　4.細(xì)粒棘球蚴蛋白在不同人體之間表達(dá)差異不大，但同一蟲體之間囊壁、原頭節(jié)、囊液蛋白表達(dá)差異大。
　　5.泡球蚴蛋白在不同地區(qū)、不同人體之