橙色紅曲菌ACS基因和GMC基因缺失菌株的構(gòu)建及其功能分析.pdf_第1頁(yè)
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1、紅曲菌是我國(guó)重要的微生物資源，能夠產(chǎn)生多種具有生物活性的代謝產(chǎn)物，具有很高的商業(yè)價(jià)值。但是由于紅曲菌產(chǎn)桔霉素問(wèn)題的存在，對(duì)紅曲的安全性提出了懷疑。 本文采用分子生物學(xué)技術(shù)，初步研究了?；o酶A合成酶(簡(jiǎn)稱(chēng)ACS)和GMC氧化還原酶(簡(jiǎn)稱(chēng)GMC)編碼基因的生物學(xué)功能，為闡明桔霉素代謝途徑提供理論依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容如下： 1.Blast比對(duì)分析，預(yù)測(cè)ACS基因?yàn)轷；o酶A合成酶的編碼基因，GMC基因?yàn)榉枷愦济摎涿傅木幋a基因，

2、推測(cè)ACS和GMC基因可能參與桔霉素生物合成途徑。 2.通過(guò)酶切、連接和轉(zhuǎn)化等DNA重組技術(shù)，成功構(gòu)建了置換型打靶載體pACS-HPH和pGMC-HPH，載體中含有潮霉素抗性標(biāo)記。 3.采用原生質(zhì)體PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化將置換型打靶載體pACS-HPH和pGMC-HPH分別轉(zhuǎn)入橙色紅曲菌AS3.4384中，采用潮霉素抗性篩選和基因組DNA的PCR篩選，分別獲得ACS-6和GMC-8紅曲菌缺失菌株。 4.采用HPLC分別檢

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