紅曲菌pksCT基因缺失株色素和桔霉素的變化及兩種新的橙色素結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、紅曲是我國傳統(tǒng)的發(fā)酵食品,具有藥用和食用雙重功效。紅曲中含有的多種活性代謝產(chǎn)物,具有降血壓、降血脂、抗菌、抗氧化和抗癌等重要的生理活性。然而由于桔霉素的存在,使得紅曲菌的應用受到限制。研究發(fā)現(xiàn),通過基因工程手段敲除與產(chǎn)桔霉素相關基因,可以降低紅曲菌產(chǎn)桔霉素的能力。
　　本論文研究了橙色紅曲菌pksCT基因缺失株及原始菌株AS3.4384液態(tài)發(fā)酵及固態(tài)發(fā)酵中桔霉素和色素產(chǎn)量變化,建立了橙色素紅斑紅曲素和紅曲玉紅素的HPLC檢測方法,

2、并分離和鑒定了紅曲中兩種新的黃色熒光物質(zhì)。主要研究及結(jié)果如下:
　　1.以橙色紅曲菌AS3.4384及其pksCT基因缺失株(PHDS26)為發(fā)酵菌株,分別于酵母浸膏蔗糖(YES)、米粉、米粉無機鹽培養(yǎng)基中進行液態(tài)發(fā)酵,采用高效液相色譜法(HPLC)檢測AS3.4384及PHDS26菌株中桔霉素的產(chǎn)量,紫外分光光度法檢測紅曲色素的產(chǎn)量。結(jié)果顯示,在上述三種培養(yǎng)基中,pksCT基因缺失株PHDS26較原始菌株桔霉素最高產(chǎn)量分別降低了

3、97.24％﹑97.02%﹑39.18%;在米粉培養(yǎng)基中色素產(chǎn)量降低了62.4%,含無機鹽的米粉培養(yǎng)基中色素產(chǎn)量提高了60.2%。固態(tài)發(fā)酵中pksCT基因缺失株PHDS26桔霉素產(chǎn)量比原始菌株AS3.4384低97.9%,而色素產(chǎn)量提高了4倍。
　　2.建立了采用HPLC法同時測定紅曲樣品中紅斑紅曲素和紅曲玉紅素,采用色譜柱Symmetry C18(5μm,250×4.6mm I.D.)和流動相乙腈-水(70:30,v/v)作為分

4、離條件;λ=465nm為紫外檢測波長。其中紅斑紅曲素的線性方程為Y=69.41X+7.49,相關系數(shù)R=0.9999,線性范圍為0.25-50μg/mL,平均回收率為96.4%;紅曲玉紅素的線性方程為Y=75.48X-2.29,相關系數(shù)R=0.9994,線性范圍為0.25-50μg/mL,平均回收率為97.6%;相對標準偏差分別為4.1%和5.0%。采用建立的HPLC方法檢測了橙色紅曲菌AS3.4384及其pksCT基因缺失株不同發(fā)酵天

5、數(shù)的大米,結(jié)果發(fā)現(xiàn)pksCT基因缺失株發(fā)酵的大米中,紅斑紅曲素和紅曲玉紅素的含量比原始菌株AS3.4384提高了5.43倍﹑14.6倍。
　　3.采用硅膠柱層析和半制備色譜從紅曲中分離、純化了兩種新的具有黃色熒光特性的橙色素,實驗證明這兩種色素為紅斑紅曲素和紅曲玉紅素與甲醇的反應產(chǎn)物。兩者分子量分別為386和414,命名為monasphilol-methoxy A(MMA)和monasphilol-methoxy B(MMB)。熒