CTLA-4在慢性HBV感染患者PBMC中表達水平及臨床意義.pdf

1、全球約2.4億人有慢性HBV感染，中國是HBV感染的高流行區(qū)。目前尚無滿意的方案來徹底治愈慢性HBV感染，HBV感染可導致肝衰竭、肝硬化以及肝癌，沒有特效的治療方法，患者的預后較差。到目前為止HBV持續(xù)感染及其進展的機制仍不明了。因此加大對HBV感染相關(guān)的基礎(chǔ)研究，為了解其發(fā)病機制和尋找新的治療思路是有必要的。HBV感染可以誘發(fā)機體產(chǎn)生以細胞毒性T細胞特異性免疫應答為主的多種免疫反應，來抵抗HBV的感染。研究發(fā)現(xiàn)HBV感染的急性期，活化

2、的特異性CD4+T細胞及CD8+T細胞發(fā)生的免疫反應能夠發(fā)揮清除病毒作用，其中CD4+T細胞通過傳遞抗原信號、分泌細胞因子，維持有效的CD8+T細胞免疫反應來發(fā)揮清除病毒的作用。當病毒不能有效清除而持續(xù)復制，將會導致HBV感染的慢性化，發(fā)展為慢性乙型肝炎并且向肝硬化、肝癌進展，HBV感染慢性化的主要原因是HBV特異性T淋巴細胞耗竭。而當免疫活性細胞的浸潤以及炎性因子的急劇增加也可導致肝細胞損傷加重，進而發(fā)生肝衰竭，但目前其發(fā)生的機制仍不

3、明確。Treg細胞是一類具有免疫抑制作用的免疫調(diào)節(jié)細胞，可對多種免疫細胞發(fā)揮抑制效應。Treg細胞可以通過細胞功能分子CTLA-4分子以及分泌IL-10、TGF-β等途徑發(fā)揮免疫抑制作用，通過抑制T淋巴細胞的活性，可以減少炎性損傷，同時也使病原體得不到徹底清除，導致感染持續(xù)存在。研究表明慢性乙型肝炎患者外周血中Treg細胞較健康人有所增加，且T淋巴細胞免疫功能下降，提示Treg細胞參與到了HBV感染的慢性化中，但具體Treg細胞在HBV

4、感染患者如何發(fā)揮免疫抑制作用的機制并不明了。細胞毒T淋巴細胞相關(guān)抗原4是Treg細胞上的負性共刺激分子受體，對Treg細胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)有重要作用，能調(diào)節(jié)T淋巴細胞的增殖、凋亡及其分泌功能，進而調(diào)節(jié)機體免疫，除表達于Treg細胞外，還可表達于活化的CD4+T細胞發(fā)揮免疫抑制作用。研究表明CTLA-4單克隆抗體阻斷CTLA-4信號可以增強T淋巴細胞的增殖及活化能力，增強免疫力，已經(jīng)開展了通過CTLA-4單克隆抗體阻斷CTLA-4信號來治療腫

5、瘤類疾病的臨床試驗。研究表明，CTLA-4參與到了慢性丙型肝炎的發(fā)病機制中，且一項CTLA-4阻斷劑治療肝癌的研究中，發(fā)現(xiàn)了CTLA-4阻斷劑的抗丙肝病毒作用，那么CTLA-4阻斷劑是否能用于慢性乙型肝炎的治療，已有研究表明不同的CTLA-4基因型患者，感染HBV后慢性化的風險不同。最近的研究發(fā)現(xiàn)HBV感染患者CD8+T細胞CTLA-4表達的水平升高，且與病毒載量相關(guān)，提示CTLA-4參與到了慢乙肝的發(fā)病中，但具體機制并不明了,因此有必

6、要進一步研究。本研究從住院病人及門診病人篩選出慢性HBV攜帶者26例（慢性HBV攜帶組），慢性乙型肝炎26例（慢性乙型肝炎組），HBV相關(guān)性肝衰竭24例（HBV相關(guān)性肝衰竭組）以及健康志愿者15例（對照組），檢測HBV感染患者不同炎癥狀態(tài)下PBMC中T細胞亞群及其表面CTLA-4的表達水平情況，初步探討CTLA-4在慢性HBV感染患者發(fā)病機制中的作用。
　　研究目的：
　　檢測不同炎癥狀態(tài)下慢性HBV感染患者PBMC中T細胞

7、亞群（CD4+T、CD8+T、Treg）及其CTLA-4的表達水平情況，初步探討Treg細胞及CTLA-4在慢性HBV感染患者免疫紊亂機制中的作用，為尋找新的治療靶點提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　研究對象為本院門診及住院患者，篩選出慢性HBV攜帶者26例（慢性HBV攜帶組）、慢性乙型肝炎26例（慢性乙型肝炎組）、HBV相關(guān)性肝衰竭24例（HBV相關(guān)性肝衰竭組），并將HBV相關(guān)性肝衰竭組患者按照預后分為好轉(zhuǎn)組與惡化組，并

8、以15例健康志愿者作為對照組。
　　應用流式細胞術(shù)檢測各組患者外周血中T淋巴細胞亞群（CD4+T、CD8+T及Treg細胞）的分布情況，并檢測CD4+T細胞及Treg細胞上CTLA-4的表達情況；檢測患者肝功能、凝血功能、血清學標志物和HBV-DNA載量，并統(tǒng)計肝衰竭組患者的預后情況。
　　研究結(jié)果：
　　1.慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組CD4+T細胞低于對照組，HBV相關(guān)性肝衰竭組中CD4+T明顯高于慢性HBV攜

9、帶組及慢性乙型肝炎組；慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組CD8+T細胞低于對照組，慢性HBV攜帶組中CD8+T明顯高于慢性乙型肝炎組及HBV相關(guān)性肝衰竭組；慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組Treg細胞高于對照組，且HBV相關(guān)性肝衰竭組、慢性HBV攜帶組均高于慢性乙型肝炎組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；
　　2.慢性HBV攜帶組、慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組CD4+T細胞中C

10、TLA-4表達水平高于對照組;慢性HBV攜帶組CD4+T細胞中CTLA-4表達水平高于慢性乙型肝炎組、HBV相關(guān)性肝衰竭組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；
　　3.HBV相關(guān)性肝衰竭組Treg細胞中CTLA-4表達水平明顯低于慢性HBV攜帶組、對照組、慢性乙型肝炎組,差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；
　　4.HBV相關(guān)性肝衰竭患者中，惡化組CD4+T細胞及Treg細胞上CTLA-4表達明顯低于好轉(zhuǎn)組，差異均有統(tǒng)計學