miR--200a在骨肉瘤中表達(dá)水平及臨床意義.pdf

1、骨肉瘤是一種好發(fā)于兒童和青少年的原發(fā)性惡性骨腫瘤，其發(fā)病率居于原發(fā)性骨腫瘤之首，它們大多發(fā)生于四肢的長(zhǎng)管狀骨，尤其是股骨遠(yuǎn)端和脛骨近端，由于腫瘤組織生長(zhǎng)迅速、侵襲能力強(qiáng)、早期轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，周圍正常的骨組織常常被腫瘤所侵蝕，給病人的生活帶來(lái)巨大影響。近幾十年以來(lái)，由于提出了新輔助化療理念、術(shù)后放化療治療水平的提高再加上外科手術(shù)技術(shù)提升，過(guò)去傳統(tǒng)的截肢術(shù)逐漸被新輔助化療聯(lián)合保肢手術(shù)所取代，骨肉瘤患者的五年生存率顯著提高至60～70％，但由于骨

2、肉瘤的高度侵襲性和早期轉(zhuǎn)移以及對(duì)化療藥物耐藥，加上目前暫無(wú)敏感性和特異性較高的腫瘤標(biāo)志物，骨肉瘤患者在前來(lái)就診時(shí)大多數(shù)已進(jìn)入癌癥晚期階段，所以患者的腫瘤復(fù)發(fā)率和死亡率仍無(wú)明顯改善。因此，迫切需要探索涉及骨肉瘤發(fā)展的潛在分子機(jī)制，以對(duì)骨肉瘤進(jìn)行早期診斷及探尋新的治療方式來(lái)改善骨肉瘤患者的預(yù)后及其生活質(zhì)量。
　　樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)是作為一類特定的抗原呈遞細(xì)胞被大家熟知，它們?cè)谌梭w中分布廣泛，普遍分布于血液

3、，組織和淋巴器官中。它們被認(rèn)為是免疫系統(tǒng)的中心，功能是橋接特異性免疫系統(tǒng)和非特異性免疫系統(tǒng)，可以產(chǎn)生強(qiáng)大的免疫應(yīng)答。近十年以來(lái)，基于DC的癌癥免疫療法圍繞著DC的這些功能來(lái)開展，旨在通過(guò)疫苗接種開發(fā)針對(duì)癌癥的免疫治療策略。為此，必須更好地了解DC免疫生物學(xué)，調(diào)節(jié)先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)以及腫瘤微環(huán)境，以及應(yīng)用科學(xué)的最新進(jìn)展，以提高其巨大的抗腫瘤免疫治療潛力。
　　微小RNA是一類長(zhǎng)度約為19～25個(gè)核苷酸片段具有調(diào)節(jié)功能的非編

4、碼RNA分子。miRNA通過(guò)與靶mRNAs的3'非翻譯區(qū)(UTR)堿基互補(bǔ)配對(duì)誘導(dǎo)信使RNA(mRNA)降解或通過(guò)與種子序列不完全堿基配對(duì)抑制mRNA翻譯來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。在人類癌癥中觀察到miRNA的異常表達(dá)，并且已經(jīng)顯示其參與多種關(guān)鍵的細(xì)胞過(guò)程，包括細(xì)胞分化，增殖和代謝。
　　DC由發(fā)育和功能不同的亞群組成，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不同DC族的發(fā)育受不同細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。此外，DC的反應(yīng)受到嚴(yán)格調(diào)控以維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。在免疫系

5、統(tǒng)中，miRNA在造血發(fā)育和細(xì)胞亞群分化過(guò)程中在檢查點(diǎn)起作用，它們調(diào)節(jié)效應(yīng)細(xì)胞功能，并牽涉維持動(dòng)態(tài)平衡。DCs受miRNA的調(diào)控，在過(guò)去的十年中，miRNA在調(diào)節(jié)DC發(fā)育和功能中的作用已經(jīng)取得了很大進(jìn)展。基于骨肉瘤的治療現(xiàn)狀，以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療可以作為一種非常有前景的治療方式來(lái)開展。
　　目的：
　　本研究通過(guò)比較miRNA-200a在骨肉瘤組織與癌旁組織、骨肉瘤患者及健康體檢者外周血、骨肉瘤細(xì)胞系及正常成骨細(xì)胞中

6、的表達(dá)水平差異，并分析其與臨床病例參數(shù)的關(guān)系，為以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的骨肉瘤的免疫治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　選取鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科及小兒外科2015年10月至2017年10月收治行骨肉瘤切除手術(shù)、病理診斷明確的40例骨肉瘤患者，征得骨肉瘤患者及家屬同意，所有納入研究的骨肉瘤患者均需排除骨肉瘤以外其他系統(tǒng)腫瘤。收集這些患者手術(shù)當(dāng)日的外周靜脈血5ml、術(shù)中收集癌組織、癌旁組織及癌旁未被侵犯的組織，其中男20例

7、，女20例，年齡介于10～48歲之間，新鮮手術(shù)標(biāo)本切除后用生理鹽水沖洗干凈并迅速保存于-80℃低溫冰箱中待用。另外收集患者臨床資料，如腫瘤大小、腫瘤浸潤(rùn)情況、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移以及其他臟器有無(wú)轉(zhuǎn)移等，同時(shí)收集本院至門診體檢的40例健康人血液標(biāo)本5ml放置于-80℃低溫冰箱中保存待用。培養(yǎng)人U2OS骨肉瘤細(xì)胞系和人hFOB1.19成骨細(xì)胞系，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)miRNA-200a在標(biāo)本和細(xì)胞中的表達(dá)水平的不同，并分析它們與患者臨床資料的關(guān)

8、系。
　　結(jié)果：
　　1.檢測(cè)miRNA-200a在骨肉瘤患者癌組織及骨肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá)水平
　　運(yùn)用qRT-PCR實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)骨肉瘤患者癌組織及癌旁組織、人骨肉瘤細(xì)胞系U2OS與人成骨細(xì)胞系hFOB1.19中miRNA-200a的表達(dá)水平，結(jié)果顯示癌組織中miRNA-200a表達(dá)量低于癌旁組織，兩組差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，骨肉瘤細(xì)胞中miRNA-200a表達(dá)量低于人成骨細(xì)胞，兩組差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義(P＜0.05)，這意味著miRNA-200a在骨肉瘤組織和骨肉瘤細(xì)胞系中低表達(dá)。另外通過(guò)對(duì)比不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤生長(zhǎng)位置、病理類型、有無(wú)轉(zhuǎn)移及不同生存情況等組間骨肉瘤組織miRNA-200a表達(dá)水平的差異，結(jié)果顯示死亡組和轉(zhuǎn)移組miRNA-200a表達(dá)水平高于存活組和非轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)，提示miRNA-200a可能在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和患者生存中發(fā)揮重要的作用。
　　2.檢測(cè)miRNA-200a在骨肉瘤患者

10、外周血中的表達(dá)水平
　　運(yùn)用qRT-PCR實(shí)驗(yàn)方法比較40例骨肉瘤患者與40例門診體檢的健康人血清當(dāng)中miRNA-200a表達(dá)水平。結(jié)果顯示相對(duì)于門診體檢的健康人，骨肉瘤患者血清中miRNA-200a表達(dá)量升高，兩組數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　miRNA-200a在骨肉瘤患者癌組織表達(dá)下調(diào)，在其血清中表達(dá)上調(diào)，表明它可能在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和患者生存中發(fā)揮重要的作用，可為以樹