成年豚鼠膝狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的體外培養(yǎng).pdf

1、目的：研究成年豚鼠面神經(jīng)膝狀神經(jīng)節(jié)解剖。對(duì)比不同培養(yǎng)條件下膝狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(GGCs)和耳螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(SGCs)的體外生長(zhǎng)特征以確定適宜的體外培養(yǎng)方法。
　　 方法：在解剖顯微鏡下對(duì)成年豚鼠顳骨內(nèi)段面神經(jīng)進(jìn)行解剖和觀察。通過(guò)光鏡下觀察解離細(xì)胞數(shù)，比較胰酶和I型膠原酶對(duì)面神經(jīng)和螺旋神經(jīng)節(jié)的消化效果。消化后采用下列兩種培養(yǎng)方案:(1)用含血清培養(yǎng)基接種，待細(xì)胞貼壁后全量換為含血清替代物的無(wú)血清培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，(2)用含低濃度血清及

2、有絲分裂抑制劑的培養(yǎng)基接種并維持培養(yǎng)。分別在培養(yǎng)后第4天、第7天、第11天和第16天在光學(xué)顯微鏡下觀察GGCs和SGCs的生長(zhǎng)特征。選取狀態(tài)良好的生長(zhǎng)期進(jìn)行神經(jīng)元細(xì)胞的免疫熒光鑒定。
　　 結(jié)果：成年豚鼠的膝狀神經(jīng)節(jié)與面神經(jīng)主干相比沒(méi)有明顯膨大，不易定位。胰酶無(wú)法消化膝狀神經(jīng)節(jié)組織，但對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)有一定消化能力。I型膠原酶消化后的膝狀神經(jīng)節(jié)組織和螺旋神經(jīng)節(jié)組織可以解離出大量游離細(xì)胞。體外GGCs主要為較小的梭形細(xì)胞，細(xì)胞核不明顯

3、，突起少但長(zhǎng)而纖細(xì)；細(xì)胞呈鏈狀聚集排列:GGCs培養(yǎng)至第11天時(shí)即出現(xiàn)大量解體。體外SGCs的胞體較大、形狀不規(guī)則，細(xì)胞核清晰可見，突起較多，臨近神經(jīng)元間形成突觸聯(lián)系；細(xì)胞呈片狀聚集生長(zhǎng)；培養(yǎng)11天時(shí)，含有有絲分裂抑制劑的低濃度血清培養(yǎng)組SGCs出現(xiàn)明顯衰退現(xiàn)象；培養(yǎng)至第16天，兩組神經(jīng)元均大量死亡。雜質(zhì)細(xì)胞多見于低濃度血清培養(yǎng)組。
　　 結(jié)論：(1)膝狀神經(jīng)節(jié)取材時(shí)可選擇顳骨內(nèi)的全程面神經(jīng)，從而保證膝狀神經(jīng)節(jié)取材的完整性。(2

4、)成年豚鼠的GGCs和SGCs可以在體外成功培養(yǎng)。(3)膝狀神經(jīng)節(jié)組織與螺旋神經(jīng)節(jié)組織適宜用I型膠原酶進(jìn)行化學(xué)消化，而胰酶僅對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)組織有一定的消化解離效果。(4)采用低濃度血清培養(yǎng)基聯(lián)合有絲分裂抑制劑培養(yǎng)，或者用高濃度血清培養(yǎng)基接種后換用含有血清替代物的無(wú)血清培養(yǎng)基維持生長(zhǎng)，都可以成功培養(yǎng)GGCs和SGCs。但低濃度血清的存在促進(jìn)非神經(jīng)元細(xì)胞的增殖，有絲分裂抑制劑雖然可以在一定程度上抑制非神經(jīng)元細(xì)胞的增殖，但其長(zhǎng)時(shí)間存在可加速神經(jīng)