神經(jīng)干細胞移植治療大鼠無神經(jīng)節(jié)細胞癥的初步研究.pdf

1、目的：探索建立適于神經(jīng)干細胞移植的巨結(jié)腸動物模型的方法，并觀察研究該模型的的病理組織學特征。觀察神經(jīng)干細胞(Neural stem cells, NSCs)在腸無神經(jīng)節(jié)細胞癥的大鼠直腸壁內(nèi)移植的存活和分化情況以及腸運動和反射功能的改善情況，探討神經(jīng)干細胞移植對腸無神經(jīng)節(jié)細胞癥的治療作用
　　 方法：清潔級8周齡SD(Sprague Dawley遠交群)大鼠60只。雌雄不拘，體重(200±15)g，由天津醫(yī)科大學實驗動物中心提供，

2、室溫單籠飼養(yǎng)。隨機分為2組:模型組(n=30)（采用BAC(苯扎氯胺)濕敷大鼠結(jié)腸腸壁;對照組(n=30)采用生理鹽水濕敷大鼠結(jié)腸腸壁）。術后通過大體解剖觀察各組對象結(jié)腸變化，HE染色觀察處理段結(jié)腸壁組織學改變。用0.5％苯扎氯銨溶液浸濕的脫脂棉緊貼腸壁包繞標記段結(jié)腸一周45分鐘，濕敷范圍3cm。術后4周通過組織病理學觀察處理段結(jié)腸神經(jīng)細胞消失。將已成功建立腸無神經(jīng)節(jié)細胞癥模型的SD大鼠60只，隨機分為2組。模型組用免疫熒光標記的提純好

3、的臍帶間充質(zhì)神經(jīng)干細胞150微升（濃度107/ml）分3處注入大鼠結(jié)腸腸壁，對照組用生理鹽水。并分別于注射后1-8周行大體觀察，免疫熒光顯微鏡觀察，鋇灌腸觀察，處理段結(jié)腸行HE染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和S-100蛋白免疫組織化學染色觀察。
　　 結(jié)果：苯扎氯胺作用后，大體解剖見對照組無異常，BAC組處理段結(jié)腸狹窄梗阻，近段結(jié)腸犬量糞便堆積，呈不同程度的擴張。組織學檢查見對照組結(jié)腸壁腸肌層排列有序，粘膜層及粘膜下層腸神

4、經(jīng)節(jié)存在。BAC組粘膜及粘膜下層無明顯病理性改變，平滑肌層增厚，肌間神經(jīng)元數(shù)目明顯減少。NSCs移植后可檢測到腸壁內(nèi)移植細胞存活，部分分化為神經(jīng)節(jié)細胞和星形膠質(zhì)細胞。HE檢測和免疫組化檢測結(jié)果顯示，模型組手術段腸壁內(nèi)神經(jīng)細胞表達明顯高于對照組（注射范圍內(nèi)均可見神經(jīng)細胞）。鋇灌腸結(jié)果顯示，神經(jīng)干細胞移植術前后結(jié)腸形態(tài)功能有明顯不同。
　　 結(jié)論：運用濃度0.5％苯扎氯按成功選擇性去除了大鼠結(jié)腸神經(jīng)節(jié)細胞，構(gòu)建成與無神經(jīng)節(jié)細胞癥具有