喹啉酸對大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)細胞的神經(jīng)興奮毒性作用及其機制.pdf

1、目的：研究喹啉酸(quinolinic acid，QA)對大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)細胞(spiral ganglioncells，SGCs)的神經(jīng)興奮毒性及其機制，探討喹啉酸在分泌性中耳炎(otitis media witheffusion，OME)致感音神經(jīng)性聽力下降(sensorineural hearing loss，SNHL)中的作用，同時觀察鎂離子在QA 致SGCs 損傷中的保護作用。
　　 方法：新生SD 大鼠SGCs原代培養(yǎng)

2、72小時后，更換培養(yǎng)基，分為QA 損傷組(neuro-basal+2％B27+1mmol/L QA)、空白對照組(neuro-basal+2％B27)、MK-801拮抗組(neuro-basal+2[％]B27+1mmol/L QA+20 μmol/L MK-801)、Mgcl2 保護組(neuro-basal+2％B27+1mmol/L QA+1mmol/L Mgcl2)，繼續(xù)培養(yǎng)24小時后，磷脂酰絲氨酸外翻分析法(Annexin-Ⅴ

3、/PI 染色)熒光顯微鏡下測定SGCs 凋亡率；激光共聚焦顯微鏡專用培養(yǎng)皿SGCs原代培養(yǎng)72h 后，分為四組，低濃度QA組(100 μmol/L QA)，高濃度QA組(1mol/L QA)，MK-801拮抗組(20 μmol/L MK-801)，Mgcl2保護組(1mmol/L Mgcl2)，激光共聚焦顯微鏡動態(tài)檢測各組SGCs 胞內(nèi)瞬時鈣離子濃度的變化。
　　 結(jié)果：與空白對照組相比，QA損傷組可見大量SGCs凋亡(59.1

4、％±7.5％vs 9.2％±0.92％，P<0.05)，Mgcl2 保護組凋亡細胞比QA組明顯減少(59.1％±7.5％vs 27.5％±8.3％,P<0.05)，MK-801組細胞凋亡率與空白對照組差異無統(tǒng)計學意義(12.8％±5.7％vs 9.2％±0.92％,P>0.05)；激光共聚焦顯微鏡下檢測SGCs 內(nèi)鈣離子濃度，在高濃度QA(1mol/L)的影響下，細胞內(nèi)鈣離子濃度明顯升高，150ms時達高峰，隨后逐漸下降，360ms時基