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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討IFN-γ調(diào)控大鼠血管平滑肌細(xì)胞HMGB1的胞外分泌和血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用和機(jī)制。
方法:取雄性SD大鼠胸主動(dòng)脈,組織貼塊法體外培養(yǎng)大鼠原代 VSMCs,予以IFN-γ處理,采用qRT-PCR和免疫印跡法(WB)檢測(cè)平滑肌細(xì)胞SIRT1的表達(dá)、HMGB1的表達(dá)以及細(xì)胞漿和細(xì)胞核HMGB1的蛋白水平,用ELISA檢測(cè)HMGB1培養(yǎng)基上清液中的含量,用免疫細(xì)胞熒光檢測(cè)HMGB1在細(xì)胞漿和細(xì)胞核的分布情況。為了進(jìn)一
2、步探討SIRT1對(duì)IFN-γ誘導(dǎo)HMGB1的胞漿移位和釋放的影響,分別用SIRT的選擇性抑制劑EX-527和激活劑Resveratrol預(yù)處理SMCs,并用WB檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi) HMGB1的蛋白量,ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)基上清液中HMGB1蛋白濃度的變化。最后,觀察IFN-γ刺激VSMCs后,其分化標(biāo)志物SM22α和調(diào)寧蛋白(Calponin)的變化,同時(shí)探討HMGB1中和性抗體對(duì)IFN-γ誘導(dǎo)SMCs表型轉(zhuǎn)化的影響。
結(jié)果
3、:IFN-γ可誘導(dǎo)VSMCs主動(dòng)分泌HMGB1蛋白,卻不改變細(xì)胞內(nèi)HMGB1蛋白的總體含量。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示,IFN-γ通過調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞中HMGB1蛋白的胞漿移位,進(jìn)而影響其胞外分泌。同時(shí),IFN-γ下調(diào)平滑肌細(xì)胞中SIRT1基因的mRNA和蛋白表達(dá)。而SIRT1選擇性抑制劑EX-527明顯增強(qiáng)IFN-γ誘導(dǎo)HMGB1胞漿移位和分泌,而SIRT1激活劑Resveratrol卻有相反的作用。IFN-γ顯著降低SMCs中SM22α和calp
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