瓊玉膏對(duì)衰老大鼠下丘腦的影響及候選靶蛋白研究.pdf

1、目的:
　　采用D-半乳糖致亞急性衰老大鼠模型，用瓊玉膏干預(yù)，取下丘腦作為研究部位，用蛋白質(zhì)組學(xué)中的同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量（iTRAQ）技術(shù)，探索瓊玉膏對(duì)衰老大鼠產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用的相關(guān)蛋白質(zhì)，對(duì)這些蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，進(jìn)一步確定瓊玉膏對(duì)衰老大鼠下丘腦作用的候選靶蛋白，從而在分子水平上探索瓊玉膏的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究瓊玉膏藥物作用靶點(diǎn)和干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，并對(duì)瓊玉膏制劑的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　將42

2、只6月齡SD雄性大鼠隨機(jī)分為3組，每組14只，分籠飼養(yǎng)每籠七只，標(biāo)記為瓊玉膏組、空白組和模型組。模型組每天以D-半乳糖按300 mg/(kg·d)進(jìn)行腹腔注射，制造亞急性衰老模型，瓊玉膏組與模型組相同，即從實(shí)驗(yàn)第一天開(kāi)始，以D-半乳糖按300 mg/(kg·d)進(jìn)行腹腔注射，空白對(duì)照組則相同方法和劑量給予生理鹽水;同時(shí)瓊玉膏組每天給予灌胃瓊玉膏0.583 ml/(100g·d)，模型組和空白對(duì)照組則給予灌胃生理鹽水0.583 ml/(1

3、00g·d)，連續(xù)用藥40天。停藥后取血清和肝臟，進(jìn)行抗氧化能力測(cè)試評(píng)價(jià)造模情況。
　　同時(shí)提取大鼠下丘腦全蛋白，利用iTRAQ技術(shù)，通過(guò)蛋白質(zhì)酶解、肽段標(biāo)記、高pH反向液相色譜分離、質(zhì)譜檢測(cè)等方法，確定顯著差異蛋白。結(jié)合基因本體論注釋（Gene Ontology）、KEGG通路分析和蛋白作用網(wǎng)絡(luò)等相關(guān)生物信息學(xué)分析，對(duì)差異蛋白的功能和屬性、代謝通路和互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析研究，最終確定與瓊玉膏作用相關(guān)的候選靶蛋白。
　　結(jié)果:<

4、br>　　1.成功建立亞急性衰老大鼠模型，模型組大鼠肝臟中SOD活力、血清中GSH-Px活力值較空白組顯著降低，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.瓊玉膏組與模型組比較，大鼠肝臟中SOD活力、血清中的GSH-Px活力值升高，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)中iTRAQ技術(shù)的處理，分析比較三組中表達(dá)量發(fā)生變化的蛋白，發(fā)現(xiàn)14種顯著差異蛋白質(zhì)。
　　這些蛋白有，細(xì)胞色素c氧化酶多肽VIc-2、中性神經(jīng)酰胺酶、植烷酸-

5、輔酶A羥化酶相互作用類蛋白、尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、尾錨定蛋白插入受體WRB、O-甘露糖β-1，4-N-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子5b、脂酰CoA合成酶、特定微管伴侶蛋白-E、3-磷酸肌醇依賴的蛋白激酶1、雙特異性作用蛋白激酶7、RAS脒基釋放蛋白2、SHC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和泛酸酯激酶4，瓊玉膏對(duì)這些蛋白均起到下調(diào)的作用。
　　4.生物信息學(xué)分析，GO注釋中差異蛋白的功能共有31種，包括生物過(guò)程15種、細(xì)胞構(gòu)成9種、分子功

6、能7種;KEGG分析發(fā)現(xiàn)主要代謝通路有5條，分別為FcεRI信號(hào)通路、泛酸和輔酶A的生物合成、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、ErbB受體信號(hào)通路以及鞘脂類代謝。
　　結(jié)論:
　　14種顯著差異蛋白包括線粒體相關(guān)蛋白、代謝相關(guān)蛋白、生長(zhǎng)分化相關(guān)蛋白、連接相關(guān)蛋白、催化相關(guān)的蛋白和信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)蛋白。經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析，瓊玉膏作用的靶蛋白可能在中性神經(jīng)酰胺酶蛋白、植烷酸-輔酶A羥化酶相互作用類蛋白、RAS脒基釋放蛋白2、SHC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、雙重