2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過對老年大鼠與青年大鼠下丘腦衰老相關(guān)基因GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3amRNA和蛋白表達水平以及GnRH1基因甲基化情況進行分析,從表觀遺傳水平探討大鼠自然衰老進程中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性及GnRH1基因甲基化的改變;通過分離新生大鼠下丘腦神經(jīng)元干細胞,建立D-半乳糖誘導的下丘腦神經(jīng)元干細胞衰老模型,比較正常神經(jīng)元干細胞組、D-半乳糖誘導衰老組與不同濃度瓊玉膏干預組之間細胞成球能力、炎性因子及NF-κ

2、B表達的差異,為揭示瓊玉膏延緩神經(jīng)元干細胞衰老的功效及其可能分子機制提供實驗參考和數(shù)據(jù)支持。
  方法:
  觀察比較6只24月齡自然衰老SD大鼠和6只2月齡青年SD大鼠下丘腦衰老相關(guān)基因mRNA和蛋白表達水平:Real-Time PCR檢測GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a基因mRNA表達水平;Western Blot檢測GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a蛋白表達水平;使用SPSS19.0統(tǒng)計軟

3、件做統(tǒng)計學分析。MSP法檢測老年大鼠和青年大鼠GnRH1基因甲基化情況。
  分離培養(yǎng)8只新生SD大鼠(出生24h內(nèi))下丘腦神經(jīng)元干細胞,免疫熒光法檢測神經(jīng)元烯醇化酶(NSE),鑒定神經(jīng)元干細胞;CCK8法檢測瓊玉膏對神經(jīng)元干細胞增殖的影響(OD值),使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件計算IC50,為后續(xù)分組實驗提供依據(jù)。取神經(jīng)元干細胞分成A、B、C、D四組,采用NSCs完全培養(yǎng)基分別對四組進行原代培養(yǎng)至第8天;從第9天起,A組繼續(xù)采用

4、培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;B組依據(jù)參考文獻加入10mg/mLD-半乳糖致衰24h;C組先加90μg/mL(1/2 IC50)瓊玉膏干預6h,再加10mg/mL D-半乳糖致衰24h;D組先加45μg/mL(1/4 IC50)瓊玉膏干預6h,再加10mg/mL D-半乳糖致衰24h。倒置熒光顯微鏡下觀察各組神經(jīng)元干細胞形態(tài)及成球能力(SFE);Real-Time PCR檢測各組腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細胞介素1β(IL-1β)mRNA表

5、達水平;Western Blot檢測核轉(zhuǎn)錄因子-kappaB(NF-κB)蛋白表達水平;Elisa檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細胞介素1β(IL-1β)蛋白表達水平;使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件做統(tǒng)計學分析。
  結(jié)果:
  1.GnRH1、Sirt1、DNMT1基因mRNA及蛋白表達水平在老年鼠中明顯降低,與青年鼠比較有顯著性差異(p<0.05); DNMT3a基因mRNA及蛋白表達水平在老年鼠和青年鼠之間無顯著

6、性差異(p>0.05);老年鼠GnRH1基因出現(xiàn)部分甲基化,青年鼠GnRH1基因未出現(xiàn)甲基化。
  2.從新生鼠下丘腦成功分離神經(jīng)元干細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞成球狀生長;免疫熒光法檢測到細胞球體有NSE清晰的紅色熒光信號,即NSE在神經(jīng)元干細胞中陽性表達。
  3.CCK8法檢測到瓊玉膏對神經(jīng)元干細胞的增殖作用(OD值)與時間和劑量存在一定的依賴關(guān)系,24h內(nèi)瓊玉膏濃度變化對細胞的影響較小;根據(jù)24h對應(yīng)的IC50值(18

7、5.91μg/mL),選取1/2 IC50(90μg/mL)和1/4 IC50(45μg/mL)作為后續(xù)分組實驗時瓊玉膏的濃度值。
  4.成功建立D-半乳糖誘導的下丘腦神經(jīng)元干細胞衰老模型,呈現(xiàn)典型的炎癥樣變化:細胞成球能力降低,腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細胞介素1β(IL-1β)mRNA和蛋白表達水平顯著增加,核轉(zhuǎn)錄因子-kappaB(NF-κB)信號通路被激活,cytoplasmP65表達水平下降,nuclear P

8、65表達水平上升。
  5.90μg/mL(1/2 IC50)瓊玉膏干預組與D-半乳糖衰老模型組比較細胞成球能力顯著恢復(p<0.05),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細胞介素1β(IL-1β)mRNA和蛋白表達水平顯著降低(p<0.05),核轉(zhuǎn)錄因子-kappaB(NF-κ B)轉(zhuǎn)錄活性被抑制,cytoplasm P65表達水平上升,nuclear P65表達水平下降。
  結(jié)論:
  1.GnRH1、Sirt1

9、基因mRNA及蛋白表達水平在老年鼠和青年鼠之間有顯著性差異,說明GnRH1、Sirt1的表達水平與增齡呈負相關(guān)。
  2.DNMT1基因mRNA及蛋白表達水平在老年鼠中顯著降低,DNMT3a基因mRNA及蛋白表達水平在老年鼠和青年鼠之間無顯著性差異,說明DNMT1的表達水平與增齡呈負相關(guān),DNMT3a的表達水平不隨增齡而變化。
  3.GnRH1基因在老年鼠中出現(xiàn)部分甲基化,在青年鼠中未出現(xiàn)甲基化,說明GnRH1基因的表達水

10、平受到其啟動子區(qū)甲基化的調(diào)控,大鼠機體發(fā)生自然衰老與GnRH1基因啟動子甲基化從而抑制GnRH1的表達水平有關(guān)。
  4.瓊玉膏能預防D-半乳糖誘導的神經(jīng)元干細胞衰老模型的炎癥反應(yīng):恢復細胞成球能力、抑制炎性指標,且其作用強度呈濃度依賴性,隨著瓊玉膏濃度從45μg/mL增加到90μg/mL,其延緩衰老作用也相應(yīng)增強。
  5.由于NF-κB具有負調(diào)控GnRH1基因mRNA表達的功能,因此瓊玉膏延緩衰老作用的可能分子機制在于抑

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