瓊玉膏經(jīng)MAPK-ERK1-2信號通路延緩大鼠脾臟衰老機制研究.pdf

1、目的:
　　建立D-半乳糖衰老大鼠模型，研究經(jīng)典養(yǎng)生膏方——瓊玉膏對D-半乳糖致衰大鼠脾臟中DNA氧化損傷標志產(chǎn)物8-OHdG作用，及其對MAPK/ERK1/2信號通路上相關(guān)基因節(jié)點的作用，并分析推斷瓊玉膏延緩脾臟衰老的可能作用機制。
　　方法:
　　將SPF級SD雄性成年大鼠（6月齡）42只，隨機分成三組:空白對照組、模型對照組（M組）以及瓊玉膏實驗組（D組），每組14只。模型對照組以及瓊玉膏實驗組大鼠每天以D-半乳

2、糖(125mg/kg)腹腔注射制造亞急性衰老大鼠模型，空白對照組大鼠則給予相同給藥量的生理鹽水腹腔注射。從實驗第一天起，瓊玉膏組給予20ml/kg瓊玉口服液灌胃給藥，模型對照組和空白對照組大鼠每天灌胃給予20ml/kg的蒸餾水。連續(xù)給藥62天后處死，取出各組大鼠脾臟，制備樣品。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測8-OHdG、Sirt3、NF-κB、及ERK1/2的表達情況;免疫印跡法檢測BCAR1及P-ERK1/2的表達情況;以及PCR法檢測BCAR

3、1 mRNA、P-ERK1/2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果:
　　1.D-半乳糖致亞急性衰老大鼠脾臟組織免疫組化檢測結(jié)果:
　　(1)實驗大鼠的脾臟組織中SIRT3呈陽性表達，瓊玉膏實驗組SIRT3表達量最高，而模型對照組組與空白對照組表達水平均較低。
　　(2)實驗大鼠的脾臟組織中8-OHdG呈陽性表達。模型對照組表達量最高，瓊玉膏實驗組表達水平最低。
　　(3)實驗大鼠的脾臟組織中NF-κ B呈陽性表

4、達。瓊玉膏實驗組表達水平明顯低于模型對照組及空白對照組。
　　(4)實驗大鼠的脾臟組織中P-ERK1/2呈陽性表達。瓊玉膏實驗組表達水平明顯低于模型對照組及空白對照組。
　　2.D-半乳糖致亞急性衰老大鼠脾臟組織中Western bloting檢測結(jié)果:
　　(1)與空白對照組相比較，模型對照組大鼠脾臟組織中BCAR1有顯著性的高表達(P＜0.01)。與模型對照組相比較，則可看出瓊玉膏對D-半乳糖致衰大鼠脾臟組織中BC

5、AR1的表達水平有明顯的抑制作用(P＜0.05)。
　　(2)與空白對照組相比較，模型對照組大鼠脾臟組織中片P-ERK1/2有顯著性的高表達(P＜0.05)。與模型對照組相比較，則可看出瓊玉膏對D-半乳糖致衰大鼠脾臟組織中P-ERK1/2的表達水平有明顯的抑制作用(P＜0.05)。
　　3.D-半乳糖致亞急性衰老大鼠脾臟組織中PCR檢測結(jié)果:
　　(1)與空白對照組相比較，模型對照組大鼠脾臟組織中BCAR1 mRNA呈

6、現(xiàn)高表達水平(P＜0.05)。與模型對照組相比較，則可看出瓊玉膏對D-半乳糖致衰大鼠脾臟組織中BCAR1 mRNA的表達水平有抑制作用(P＜0.05)。
　　(2)與空白對照組相比較，模型對照組大鼠脾臟組織中P-ERK1 mRNA呈現(xiàn)高表達水平(P＜0.01)與模型對照組相比較，則可看出瓊玉膏對D-半乳糖致衰大鼠脾臟組織中P-ERK1 mRNA的表達水平有抑制作用(P＜0.05)。
　　(3)與空白對照組相比較，模型對照組大

7、鼠脾臟組織中P-ERK2 mRNA呈現(xiàn)高表達水平(P＜0.05)。與模型對照組相比較，則可看出瓊玉膏對D-半乳糖致衰大鼠脾臟組織中P-ERK2 mRNA的表達水平有抑制作用(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.瓊玉膏口服液的干預(yù)治療對D-半乳糖致亞急性衰老大鼠中脾臟組織有氧化保護作用，可有效降低大鼠脾臟組織細胞DNA氧化損傷水平;
　　2.瓊玉膏口服液干預(yù)治療下D-半乳糖致亞急性衰老大鼠中脾臟組織中的SIRT3蛋白表