瓊玉膏干預(yù)衰老大鼠模型的脾臟差異蛋白研究.pdf

1、目的:
　　對(duì)衰老機(jī)理的研究是現(xiàn)代老年基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中一項(xiàng)重要課題，現(xiàn)已有大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)成為眾多衰老機(jī)制學(xué)說立足的證據(jù)。本實(shí)驗(yàn)將以D-半乳糖致衰老雄性SD大鼠的脾臟作為實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象，應(yīng)用瓊玉膏方進(jìn)行干預(yù)，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)脾臟總蛋白進(jìn)行差異分析，分析瓊玉膏作用于的差異蛋白的蛋白定量、功能性質(zhì)，從而解釋瓊玉膏在延緩衰老中的作用機(jī)理，為開發(fā)瓊玉膏制劑開創(chuàng)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:
　　將42只6月齡SD雄性大鼠隨機(jī)

2、分為3組，空白組、模型組、藥物組，每組14只，空白組采用腹腔注射生理鹽水300mg/kg·d，灌胃蒸餾水5.83ml/kg·d;模型組采用腹腔注射D-半乳糖300mg/kg·d，灌胃蒸餾水5.83ml/kg·d;藥物組采用腹腔注射D-半乳糖300mg/kg·d，灌胃瓊玉膏5.83ml/kg·d.連續(xù)40天后，進(jìn)行血清、心臟和脾臟組織提取。利用iTRAQ技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，提取總蛋白、對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解、肽段標(biāo)記、肽段除鹽、質(zhì)譜鑒定，運(yùn)

3、用Mascot搜庫(kù)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，再?gòu)腢niprot-SwissProt_Rat庫(kù)中查詢蛋白質(zhì)定性信息，鑒定總蛋白，分析組間差異蛋白的功能及屬性。
　　結(jié)果:
　　1.建立了D-半乳糖致衰亞急性大鼠模型
　　2.與空白組相比，模型組大鼠血清MDA含量較高，兩組大鼠間的血清MDA含量對(duì)比有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組大鼠相比，藥物組大鼠血清MDA含量較低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

4、0.01)。
　　3.與空白組相比較，模型組大鼠的心臟組織SOD含量較低，兩組大鼠間的心臟組織SOD含量對(duì)比有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組大鼠相比，藥物組大鼠心臟組織SOD含量較高，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.運(yùn)用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，比較模型組和藥物組的脾臟組織，發(fā)現(xiàn)共有18種蛋白質(zhì)的表達(dá)量在組間發(fā)生了變化:藥物組與模型組相較，上調(diào)蛋白7個(gè)，包括Δ1-二氫吡咯-5-羧酸

5、脫氫酶，線粒體、高爾基SNAP受體復(fù)合物1、CDC42效應(yīng)蛋白1、乳腺癌易感基因1型、C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族11成員A、NGFI-A結(jié)合蛋白1、線粒體解偶聯(lián)蛋白3;藥物組與模型組相比，下調(diào)蛋白11個(gè)，包括蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型6、絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶PP1、煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、鈣調(diào)磷酸酶B同源蛋白1、E3泛素蛋白連接酶Cbl-b、磷酸肌3-磷酸、冠蛋白-7、Endophilin-B2、G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白1、Uncharacteri