雪上一枝蒿生物堿提取純化工藝研究及其毒性與有效性的初步評(píng)價(jià).pdf

1、目的:研究雪上一枝蒿生物堿提取、純化工藝條件;初步考察雪上一枝蒿的毒性和有效性。
　　方法:以雪上一枝蒿甲素（雪甲素）和雪上一枝蒿總生物堿（雪總堿）提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選雪總堿提取工藝;采用單因素法考察雪總堿的純化工藝;以急性毒性試驗(yàn)和藥效試驗(yàn)，尋找雪上一枝蒿不同制劑的治療窗范圍;采用大鼠心臟毒性試驗(yàn)、豚鼠皮膚刺激性和過敏性試驗(yàn)，初步評(píng)價(jià)雪總堿微乳、雪總堿溶液皮膚用藥的安全性。
　　結(jié)果:雪上一枝蒿提取工藝條件為

2、:水煎煮法提取3次，每次1h，每次加12倍量水;純化工藝采用001×7型陽(yáng)離子交換樹脂，樹脂徑高比為1∶9，上樣藥液濃度以含生藥量計(jì)為0.25 g·mL-1，以2.0 mE· min-1流速動(dòng)態(tài)上樣5BV，2.0mL·min-1流速水洗10BV，0.02 g·mL-1氯化鈉-50％乙醇作為解析液，以0.5mL·min-1流速洗脫20BV;解析液調(diào)pH值至6～7，解析液干燥物用10倍量乙醇回流提取1次，時(shí)間1h;乙醇提取干燥物用氯仿回流提

3、取2次，第一次8倍量氯仿，第二次6倍量氯仿，每次1.5h，所得純化物中雪甲素的純度為19.55％、雪總堿的純度為60.57％。經(jīng)皮給藥試驗(yàn)中，雪上一枝蒿藥材醇提液、雪總堿微乳及雪總堿溶液均無(wú)中毒反應(yīng)及死亡情況。雪總堿微乳、雪總堿溶液對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有一定的抗炎作用，其中雪總堿微乳發(fā)揮抗炎作用所需劑量減少。皮內(nèi)注射給藥試驗(yàn)中，雪總堿微乳、雪總堿溶液及藥材醇提液發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的治療指數(shù)TI分別為10.460、6.825、5.25，安全

4、系數(shù)SF分別為1.788、1.650、1.178;發(fā)揮抗炎作用的治療指數(shù)TI分別為4.083、2.751、3.405，安全系數(shù)SF分別為1.070、0.700、0.851。心臟毒性試驗(yàn)中，雪總堿微乳與雪總堿溶液給予相同劑量時(shí)，經(jīng)皮給藥對(duì)大鼠心臟毒性與正常組無(wú)顯著性差異;皮內(nèi)注射給藥，雪總堿微乳對(duì)大鼠心電圖及心功能各項(xiàng)指標(biāo)的影響與正常組比較有顯著性差異。皮膚刺激性試驗(yàn)中，雪總堿微乳、雪總堿溶液及其相應(yīng)賦形劑單次給藥與多次給藥對(duì)完整皮膚及破

5、損皮膚刺激性的平均分值均小于0.49。皮膚過敏性試驗(yàn)中，陽(yáng)性對(duì)照組豚鼠的致敏率達(dá)到100％，雪上一枝蒿各藥物組及相應(yīng)賦形劑組受試區(qū)皮膚自激發(fā)給藥6～72h均未出現(xiàn)紅斑及水腫。此外，均未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)及休克等嚴(yán)重的全身性過敏反應(yīng)。
　　結(jié)論:雪上一枝蒿生物堿提取純化工藝穩(wěn)定、可行，所制得純化物純度達(dá)到要求。雪上一枝蒿藥材醇提液、雪總堿微乳及雪總堿溶液經(jīng)皮給藥不產(chǎn)生急性毒性，且具有一定的抗炎作用。雪總堿微乳皮內(nèi)注射發(fā)揮鎮(zhèn)痛、抗炎作