蓮子心中黃酮類物質(zhì)與生物堿的分離純化工藝研究.pdf

1、蓮子心(Plumula Nelumubinis)為睡蓮科蓮屬植物蓮(Nelumbonucifera Gaertn)成熟種子中的綠色幼葉及胚根，是一種常用藥材。蓮子心中含生物堿、黃酮、多糖及揮發(fā)油等多種活性物質(zhì)，具有降壓、抗心律失常、降血糖、逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥、抗氧化等藥理活性，在臨床治療及預(yù)防保健方面具有廣泛的應(yīng)用價值。以往對蓮子心的研究主要集中在生物堿類物質(zhì)的提取分離純化及藥理活性，而對蓮子心黃酮類物質(zhì)的研究較少，未能將蓮子心資源充分利

2、用。更重要的是，對蓮子心中生物堿的分離常使用有毒的有機溶劑，處理繁瑣，對環(huán)境及人身危害較大，不適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。為了充分利用蓮子心資源，克服現(xiàn)有工藝的缺點，本課題建立了一種在純化蓮子心生物堿的同時，富集蓮子心中黃酮類物質(zhì)的方法，主要研究內(nèi)容與所得結(jié)果如下：
　　 1.ZTC1+1-Ⅱ型澄清劑應(yīng)用于蓮子心提取液的除雜工藝研究
　　 應(yīng)用ZTC1+1-Ⅱ型澄清劑處理蓮子心提取液，以去除葉綠素、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)。以

3、Nef保留率及固形物去除率為指標(biāo)，在單因素實驗的基礎(chǔ)上，運用正交實驗設(shè)計，優(yōu)化工藝條件。在藥液濃度為1:6，在80℃下先加入澄清劑B組分0.8 mL·g-1，攪拌10 min后保溫30 min；再加入A組分0.4 mL·g-1，攪拌10 min后保溫30 min的工藝條件下，固形物去除率為22.81％、甲基蓮心堿含量保留率為89.42％。采用ZTC1+1-Ⅱ型澄清劑對蓮子心提取液進行預(yù)處理，可以起到較好的除雜效果。
　　 2.殼

4、聚糖對蓮子心提取液的除雜工藝研究
　　 采用殼聚糖作為澄清劑處理蓮子心提取液，以固形物去除率、甲基蓮心堿保留率為指標(biāo)，在單因素分析的基礎(chǔ)上采用正交實驗設(shè)計及響應(yīng)面法Box-Benhnken中心組合實驗設(shè)計對比優(yōu)化了除雜工藝條件。結(jié)果表明在蓮子心提取液藥液比為1:5或1:5.5，殼聚糖加入量為1.2 mL·g-1，作用溫度為60℃，pH值為6.2的工藝條件下，固形物去除率約為22％，Nef保留率約為90％。正交實驗設(shè)計與響應(yīng)面法優(yōu)

5、化的工藝條件差別不大。
　　 3.離子交換樹脂同步分離和富集蓮子心中黃酮類物質(zhì)與生物堿
　　 采用靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附相結(jié)合的方法，篩選了幾種不同性質(zhì)的陽離子交換樹脂，最終確立了4撐大孔陽離子交換樹脂分離和富集蓮子心中黃酮類物質(zhì)與生物堿的工藝：稱取20.00g(約30mL)已處理好的樹脂，純化水濕法裝柱(直徑16mm，高150mm)，分別吸取藥液比為1:6的蓮子心除雜液240mL(8BV)上柱，依次用5BV純化水洗去雜質(zhì)，

6、10BV70％乙醇洗脫黃酮類物質(zhì)，7BV0.02 g·mL-1NaCl-70％乙醇洗脫生物堿，流速為2BV·h-1。研究結(jié)果表明，純化后黃酮和生物堿純度大大提高，精制倍數(shù)可分別達(dá)27.08倍及9.48倍，洗脫率分別為84.28％及88.84％。表明該工藝較為穩(wěn)定可靠，且分離富集效果顯著。
　　 4.蓮子心中黃酮類物質(zhì)的純化與結(jié)構(gòu)表征
　　 利用聚酰胺柱層析對分離后的總黃酮進行分步梯度洗脫，得到20％、30％、40％、50