腮腺炎病毒誘導(dǎo)小鼠睪丸天然免疫反應(yīng)的機(jī)制.pdf

1、目的:腮腺炎病毒(mumps vims，MuV)感染常引發(fā)睪丸炎，導(dǎo)致男性不育。雖然疫苗的使用已有效地控制了腮腺炎病毒的大范圍流行，但近來(lái)臨床上腮腺炎病毒感染并發(fā)的睪丸炎有復(fù)發(fā)趨勢(shì)。認(rèn)識(shí)MuV誘導(dǎo)睪丸天然免疫反應(yīng)的機(jī)制，可為疾病防治提供線索。本文利用小鼠為模型，研究MuV誘導(dǎo)睪丸天然免疫反應(yīng)的機(jī)制及其在睪丸細(xì)胞的復(fù)制與調(diào)控。
　　材料與方法:以C57BL/6或Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)基因敲除小

2、鼠（TLR2-/-，TLR3-/-和TLR4-/-）為模型，分離原代睪丸細(xì)胞。采用結(jié)晶紫染色感染的Vero細(xì)胞，測(cè)定病毒滴度。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)水平，ELISA測(cè)定細(xì)胞因子的濃度水平，以及Western blot，免疫組織化學(xué)和免疫熒光的方法檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平與細(xì)胞分布。并結(jié)合RNA干擾技術(shù)研究相關(guān)基因的功能。
　　結(jié)果:MuV可通過(guò)TLR2和RIG-Ⅰ信號(hào)通路誘導(dǎo)Sertoli及Leydig細(xì)胞產(chǎn)生天然免疫反應(yīng)，產(chǎn)

3、生TNF-α、 IL-6、MCP-1、CXCL10及Ⅰ型干擾素(IFN-α和IFN-β)等細(xì)胞因子，而不能誘導(dǎo)生精細(xì)胞產(chǎn)生這些細(xì)胞因子。MuV感染后，Sertoli細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子及趨化因子水平較Leydig細(xì)胞高，但I(xiàn)FN-α與IFN-β水平要低于Leydig細(xì)胞。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，睪丸原位感染MuV可誘發(fā)睪丸局部天然免疫反應(yīng)，并抑制Leydig細(xì)胞合成睪酮。
　　MuV能夠感染多種睪丸細(xì)胞，包括Sertoli、Leydig、巨噬

4、細(xì)胞和生精細(xì)胞，但MuV在不同細(xì)胞中的復(fù)制效率存在差異，這與細(xì)胞特異的抗病毒防御機(jī)制有關(guān)。MuV在Sertoli細(xì)胞中能快速?gòu)?fù)制并持續(xù)存在，在Leydig細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中也有顯著性的復(fù)制，但在生精細(xì)胞中則檢測(cè)不到病毒的復(fù)制。Sertoli，Leydig，和巨噬細(xì)胞主要依靠產(chǎn)生Ⅰ型干擾素和抗病毒蛋白來(lái)抵御病毒感染，生精細(xì)胞則是依賴自身高水平的自噬來(lái)限制病毒的復(fù)制。
　　結(jié)論:MuV能夠誘導(dǎo)睪丸Sertoli及Leydig細(xì)胞產(chǎn)生天然