模式識別受體介導(dǎo)的小鼠附睪天然免疫反應(yīng).pdf

1、目的:多種病原體（包括細菌、病毒、寄生蟲）感染可誘導(dǎo)附睪炎，干擾附睪功能，是損害男性生育能力的重要病因。其中尿路致病性大腸桿菌（UropathogenicE coli，UPEC）、腮腺炎病毒(Mumps Virus，MuV)、皰疹病毒（Herpes simplex virus2，HSV-2）是誘導(dǎo)附睪炎的主要病原體，然而這些病原體誘導(dǎo)附睪炎的機制尚不清楚，本論文以小鼠為模型，旨在研究主要病原體誘導(dǎo)的附睪天然免疫反應(yīng)的機制。
　　方

2、法:利用TLR2-/-、TLR4-/-、TLR5-/-小鼠模型，結(jié)合RNA干擾技術(shù)研究相關(guān)基因的功能。體外分離與培養(yǎng)原代附睪上皮細胞(epididymal epithelial cells，EECs)，用UPEC、MuV與HSV-2感染細胞。利用Real-time RT-PCR實時定量分析基因的mRNA表達水平，Western blot檢測基因產(chǎn)物的蛋白水平，免疫組化染色定位蛋白的細胞分布，ELISA檢測細胞因子的分泌。附睪原位注射病原

3、體模擬體內(nèi)感染，分析附睪抵御病原體的天然免疫反應(yīng)。
　　結(jié)果:EEC表達多個模式識別受體，其中TLR4、TLR5可以被UPEC激活并介導(dǎo)EEC的天然免疫反應(yīng)。TLR2和RIG-Ⅰ可以被MuV激活，DNA感受器DAI、p204、cGAS可以被HSV-2誘導(dǎo)上調(diào)表達并激活，介導(dǎo)EEC的天然抗病毒反應(yīng)。UPEC和MuV都可以顯著誘導(dǎo)促炎性細胞因子、趨化因子和Ⅰ型干擾素(IFN-α與IFN-β)的表達上調(diào)，而HSV-2僅有效上調(diào)IFN-α

4、與IFN-β的表達。
　　在TLR4-/-、TLR5-/-EEC中，附睪抵御UPEC的天然免疫反應(yīng)都明顯低于野生(WT)細胞，說明TLR4與TLR5協(xié)同介導(dǎo)UPEC誘導(dǎo)的反應(yīng)。將TLR2敲除或siRNA沉默RIG-Ⅰ后，EEC抗MuV病毒的反應(yīng)也都明顯降低，說明TLR2及RIG-Ⅰ協(xié)同介導(dǎo)MuV誘導(dǎo)的天然抗病毒反應(yīng)。利用siRNA敲低DNA感受器p204、DAI、cGAS時，細胞抗HSV-2病毒能力明顯減弱，說明DNA感受器協(xié)同介