補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方對強(qiáng)直性脊柱炎動(dòng)物模型IL-23-Th17軸的影響.pdf

1、目的:
　　本文觀察補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方對強(qiáng)直性脊柱炎動(dòng)物模型免疫炎癥的作用，以及對IL-23/Th17軸的影響。
　　方法:
　　選擇使用BALB/c小鼠于第0天、第20天、第40天尾部皮下注射牛軟骨來源蛋白聚糖構(gòu)建蛋白聚糖誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎模型(PGIA)，作為研究的強(qiáng)直性脊柱炎動(dòng)物模型。在此基礎(chǔ)上設(shè)置對照組、模型組、補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組和塞來昔布組，每組10只。空白組為正常BALB/c小鼠，其余各組經(jīng)過PGIA造模操作。在第6

2、1-90天，空白組、模型組小鼠給予生理鹽水灌胃，補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組小鼠給予臨床等效劑量的補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方水提液灌胃，塞來昔布組小鼠給予臨床等效劑量的塞來昔布溶液灌胃，每天一次。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處理小鼠，行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)觀察。主要實(shí)驗(yàn)指標(biāo)包括:用國際動(dòng)物關(guān)節(jié)炎評分量表進(jìn)行小鼠后爪關(guān)節(jié)腫脹評分;小動(dòng)物活體成像儀對小鼠脊椎關(guān)節(jié)、爪關(guān)節(jié)腫脹情況進(jìn)行觀察;進(jìn)行脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)(TI)測量;提取脾臟總淋巴細(xì)胞，CCK-8法測量細(xì)胞增殖影響，用流式細(xì)胞術(shù)分析T

3、h17細(xì)胞比例;采集血清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測量TNF-α、白介素IL-17、IL-23表達(dá)水平;提取腸壁組織總蛋白，并且ELISA法測量回腸IL-17、IL-23組織蛋白表達(dá)水平;用HE染色法、番紅-固綠O染色對骶髂關(guān)節(jié)或腰椎、尾椎關(guān)節(jié)進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，免疫組織化學(xué)染色法觀察骨干內(nèi)IL-17、IL-23的表達(dá)情況。
　　成果:
　　1、相對于對照組，BALB/c小鼠經(jīng)商品化牛蛋白聚糖反復(fù)免疫后，自發(fā)出現(xiàn)后爪

4、關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)炎評分顯著增加(P＜0.001);SI、TI指數(shù)顯著上升(P＜0.05);血清TNF-α表達(dá)水平顯著升高（P＜0.001）;血清IL-17表達(dá)水平顯著升高（P＜0.001）;IL-23表達(dá)水平較對照組顯著升高(P＜0.001);脾臟總淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)24小時(shí)后，活力較對照組顯著下降(P＜0.001); Th17細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞比例升高;腸壁IL-17、IL-23蛋白表達(dá)水平與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;組織病理

5、學(xué)染色顯示PGIA小鼠骶髂關(guān)節(jié)軟骨化生增多，骶髂關(guān)節(jié)逐漸融合，椎間盤炎癥細(xì)胞浸潤、纖維環(huán)結(jié)構(gòu)破壞和血管生成，尾椎關(guān)節(jié)破壞，證明PGIA小鼠模型構(gòu)建成功。PGIA小鼠骨干內(nèi)IL-17陽性細(xì)胞鼠較對照組顯著增加(P＜0.001)，IL-23同樣顯著表達(dá)(P＜0.01)。
　　2、相對于模型組，補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組關(guān)節(jié)腫脹評分明顯降低（P＜0.05）;SI、TI指數(shù)均有所降低;補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方水提液干預(yù)體外培養(yǎng)24小時(shí)后，對總淋巴細(xì)胞的活力較

6、干預(yù)前顯著增加（P＜0.01），說明補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方水提液對PGIA小鼠脾臟總淋巴細(xì)胞有促進(jìn)增殖作用;補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組小鼠血清TNF-α表達(dá)水平較模型組顯著下降(P＜0.01); Th17細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞比例較模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;腸壁IL-17、IL-23蛋白表達(dá)水平與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;HE染色發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞情況較模型組有所改善，關(guān)節(jié)面邊緣較為整齊;同時(shí)椎間盤組織較為完整，少見淋巴細(xì)胞分布。番紅-固

7、綠染色發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組骶髂關(guān)節(jié)較完整，椎間盤軟骨破壞改善，尾椎融合現(xiàn)象減輕。補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組骨干內(nèi)IL-17陽性細(xì)胞鼠較對照組顯著增加（P＜0.001），IL-23同樣顯著表達(dá)（P＜0.01），但表達(dá)與模型組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、相對于模型組，塞來昔布組關(guān)節(jié)腫脹評分有所降低，SI、TI指數(shù)有所降低;塞來昔布溶液干預(yù)體外培養(yǎng)24小時(shí)后，對總淋巴細(xì)胞的活力較模型組顯著增加(P＜0.01)，說明塞來昔布溶液對

8、PGIA小鼠脾臟總淋巴細(xì)胞有促進(jìn)增殖作用;塞來昔布組小鼠血清TNF-α表達(dá)水平較模型組有所下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;Th17細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞比例較模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;腸壁IL-17、IL-23蛋白表達(dá)水平與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);HE染色發(fā)現(xiàn)塞來昔布組較模型組骶髂關(guān)節(jié)受累情況有所改善，但仍有輕微關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增生，椎間盤結(jié)構(gòu)輕微破壞。番紅-固綠染色發(fā)現(xiàn)塞來昔布組骶髂關(guān)節(jié)較完整，軟骨細(xì)胞和少許血管生成。塞來昔

9、布組小鼠骨干內(nèi)IL-17陽性細(xì)胞鼠較對照組顯著增加(P＜0.001)，IL-23同樣顯著表達(dá)(P＜0.05)，但表達(dá)與模型組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4、塞來昔布作為本研究中的陽性對照藥，在降低關(guān)節(jié)腫脹評分、SI、TI，增加總淋巴細(xì)胞活力等方面，與補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方干預(yù)結(jié)果相似。補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方組在改善體內(nèi)炎癥，維持骶髂關(guān)節(jié)、椎間盤結(jié)構(gòu)完整性方面稍微優(yōu)于塞來昔布組;但在對骨干內(nèi)IL-23、IL-17的調(diào)控作用上，塞來昔布

10、有更好的下調(diào)趨勢，不過二者與模型組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1、本研究證明PGIA小鼠模型構(gòu)建成功，PGIA小鼠體內(nèi)存在IL-23/Th17軸的失衡，可用于AS發(fā)病機(jī)制和靶向IL-23/Th17軸藥物篩選的研究。
　　2、本文數(shù)據(jù)表明，補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方干預(yù)可以改善PGIA小鼠炎癥，改善骶髂關(guān)節(jié)和軟骨破壞，說明補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方干預(yù)對PGIA小鼠模型具有確切的效果。
　　3、補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方對PGIA模型體內(nèi)改