c-Abl激酶在L-選擇素介導(dǎo)的信號通路中的作用研究.pdf

1、白細(xì)胞沿著血管內(nèi)皮滾動、穩(wěn)定粘附，最終到達(dá)炎癥部位是一個復(fù)雜的，多步驟的過程。在這個過程中有很多分子參與。選擇素家族分子對于白細(xì)胞沿著血管內(nèi)皮的滾動起重要作用。L-選擇素是選擇素家族的一員，組成性的表達(dá)在白細(xì)胞微絨毛頂端，對白細(xì)胞與血管內(nèi)皮的起始粘附起主要作用。L-選擇素不僅可以作為一個粘附分子，還能作為一個信號分子在粘附事件中發(fā)揮作用。L-選擇素與其單克隆抗體的結(jié)合，能引起細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞骨架重排，氧呼吸爆發(fā)，細(xì)胞內(nèi)IL-8以及TN

2、F α基因的表達(dá)上調(diào)等。在L-選擇素起始的信號事件中，有激酶分子的參與，但具體的分子機制還很不清楚。c—Abl激酶是一類非受體酪氨酸激酶，具有F-肌動蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域，能夠被整合素以及生長因子受體結(jié)合而活化，從而調(diào)節(jié)F-肌動蛋白依賴的細(xì)胞骨架的變化。我們推測，c-Abl激酶也可能參與了L-選擇素交聯(lián)起始的信號事件。本文主要探討了c-Abl分子是否以及如何參與了由L-選擇素交聯(lián)起始的信號事件。 c-Abl的激酶活性在細(xì)胞內(nèi)受到分子

3、間和分子內(nèi)雙重的嚴(yán)格調(diào)控。我們的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)L-選擇素交聯(lián)以后，c-Abl激酶活性增強。如果在活化細(xì)胞前用c-Abl的抑制劑處理細(xì)胞，則c-Abl的激酶活性降低。c-Abl的激酶活性變化和L-選擇素交聯(lián)引起的F-肌動蛋白的變化相一致。在活化的細(xì)胞內(nèi)，c-Abl的定位也發(fā)生變化。在靜止細(xì)胞中，c-Abl激酶均勻的分布在整個細(xì)胞中，而L-選擇素交聯(lián)活化的細(xì)胞內(nèi)，c-Abl激酶聚集在F-肌動蛋白以及L-選擇素富集的部位。在細(xì)胞活化前用c-Ab

4、l的激酶抑制劑處理，三者的共定位現(xiàn)象消失。用抑制F-肌動蛋白聚合的抑制劑CB處理活化前的細(xì)胞，三者的共定位現(xiàn)象也減弱。說明L-選擇素交聯(lián)引起的F-肌動蛋白依賴的細(xì)胞骨架的變化依賴于c-Abl酶的活性。 c-Abl激酶還參與了由L-選擇素交聯(lián)引起的集落刺激因子-1(CSF-1)基因的表達(dá)。過表達(dá)野生型而不是激酶突變型的c-Abl能夠增強由L-選擇素交聯(lián)引起的CSF-1基因的表達(dá)上調(diào)。用c-Abl激酶抑制劑處理活化前的細(xì)胞則降低了

5、由c-Abl過表達(dá)引起的CSF-1基因的表達(dá)。說明L-選擇素交聯(lián)引起的CSF-1基因的表達(dá)增強依賴于c-Abl的激酶活性。ZAP70激酶是T細(xì)胞活化后最先被活化的分子之一。過表達(dá)野生型而不是激酶突變型或者Y319F突變型的ZAP70也能增強CSF-1基因的表達(dá)增強。在L-選擇素交聯(lián)活化以前，用c-Abl以及ZAP70抑制劑處理發(fā)現(xiàn)c-Abl激酶通過調(diào)節(jié)ZAP70 Y319的磷酸化來調(diào)節(jié)CSF-1基因的表達(dá)。 通過蛋白質(zhì)免疫共沉

6、淀以及GST-pull down實驗，我們發(fā)現(xiàn)在L-選擇素活化的T細(xì)胞內(nèi)，L-選擇素、c-Abl以及ZAP70三者結(jié)合在一起。通過L-選擇素不同刺激時間來檢測三者的結(jié)合關(guān)系，我們發(fā)現(xiàn)c-Abl激酶和L-選擇素組成性的結(jié)合在一起，隨著L-選擇素交聯(lián)時間的增加，更多的ZAP70聚集到c-Abl激酶的SH2結(jié)構(gòu)域。 我們的結(jié)果證明了L-選擇素交聯(lián)引起的信號事件中，c-Abl激酶起到了很重要的作用。它不僅通過激酶活性的變化來調(diào)節(jié)F-肌