海洋微生物的拮抗菌篩選及一株抗酵母放線菌YT研究.pdf

1、對山東煙臺、青島等海邊地區(qū)采集的不同樣品(包括海水、海水泡沫、海砂、海泥、藻類、海洋無脊椎動物和腐木等)，用平板稀釋法分離海洋微生物，共分離到細(xì)菌128株，放線菌36株和霉菌102株。以釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、黑曲霉為測試菌，對上述菌株采用紙片法篩選產(chǎn)抗菌物質(zhì)的微生物，結(jié)果表明從海水泡沫和海泥分離出產(chǎn)抗菌物質(zhì)的細(xì)菌占從該類樣品分離總細(xì)菌株數(shù)比例高，分別為63.6％和55.0％：從海水和海洋無脊椎動物中分離出產(chǎn)抗菌物質(zhì)的放線菌占

2、從該類樣品分離總放線菌株數(shù)比率高，各占50.0％；從腐木和海水泡沫分離出產(chǎn)抗菌物質(zhì)的真菌占從該類樣品分離總真菌株數(shù)比率高，分別為50.0％和45.5％。細(xì)菌和放線菌抗酵母比率高于其它類型測試菌，且抗枯草桿菌比率高于大腸桿菌，而真菌抗大腸桿菌比率高于枯草芽孢桿菌。 本文對一株分離自無脊椎動物的放線菌YT進(jìn)行研究。經(jīng)過個體形態(tài)特征和培養(yǎng)特征可以初步鑒定為鏈霉菌屬(Streptomyces)的白孢類群(Albosporus)，16Sr

3、DNA序列和分子進(jìn)化樹表明其與GeneBank比對的菌株最大相似性僅有90％，其種屬歸類需進(jìn)一步研究?？咕V測定結(jié)果表明該菌株對白假絲酵母菌和釀酒酵母有較強的拮抗性。 為了提高抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量，對其培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。用杯碟法測發(fā)酵液的活性，篩選出最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為黃豆粉，Mg<'2+>和Ca<'2+>離子對抗菌物質(zhì)產(chǎn)生有促進(jìn)作用。Plackett-Burman實驗確定對產(chǎn)抗菌物質(zhì)的主要影響因素為葡萄糖、黃豆粉和N

4、aCl，中心組合實驗確定培養(yǎng)基最佳組成為葡萄糖0.83％，黃豆粉1.24％，氯化鈉1.38％。同時選取幾個重要發(fā)酵工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，實驗結(jié)果表明最佳接種量為8％，最佳裝液量為250mL 三角瓶裝量50mL ，最佳產(chǎn)抗生素溫度為25℃。 對菌株YT產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)分析表明：該抗菌物質(zhì)對pH具有較好的穩(wěn)定性，而經(jīng)高溫和UV處理抗菌活性部分失活，且為非極性化合物。生物顯影和化學(xué)顯色確定了發(fā)酵液中存在兩種抗生素，而胞內(nèi)存在一種抗菌