煙草青枯菌拮抗放線菌的篩選、鑒定及發(fā)酵條件研究.pdf

1、煙草青枯病是由茄勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一種細(xì)菌性病害，在國內(nèi)的廣東、福建等南方地區(qū)普遍發(fā)生。近幾年來，該病的發(fā)生和危害范圍有向北方煙區(qū)擴(kuò)展的趨勢，在山東、河南及陜西等省均有發(fā)生，局部地區(qū)為害較重，已成為煙草主要病害之一。傳統(tǒng)的化學(xué)防治方法不僅成本高、污染重、破壞土壤生態(tài)，而且造成農(nóng)產(chǎn)品有害物質(zhì)殘留超標(biāo)。因此，進(jìn)一步篩選對青枯病有較理想防治效果的生防菌株，對于煙草生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境等各方面均有著十分重要

2、的意義。本研究針對煙草青枯病菌，主要進(jìn)行了拮抗放線菌的篩選、鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化、發(fā)酵產(chǎn)物的穩(wěn)定性及促生作用的研究。主要研究結(jié)果如下： 1.采用稀釋平板法從土壤中分離到87株放線菌。采用平板對峙法和瓊脂擴(kuò)散法相結(jié)合的方法對其進(jìn)行初步篩選和再次篩選，獲得了對煙草青枯病菌拮抗活性較強(qiáng)的3個放線菌菌株。其中來源于臨沂蒙陰縣土樣的Y23菌株發(fā)酵液對煙草青枯病菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑為13.4mm。Y23菌株除對煙草青枯病菌具有很強(qiáng)的拮

3、抗活性外，還對多種煙草病原真菌，如煙草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)、煙草炭疽病菌(Colletotrichum nicotianae)、煙草赤星病菌(Alternaria alternate)等都表現(xiàn)出不同程度的抑菌活性。 2.對Y23菌株的形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察、生理生化特性分析、細(xì)胞壁組分測定及16S rRNA序列分析結(jié)果表明：該菌基內(nèi)菌絲無橫隔、不斷裂、氣生菌絲多分枝，孢子短桿狀，表面光滑；細(xì)胞壁

4、化學(xué)組分I型，糖型C型，表明該菌株屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)；同時，在以16SrRNA序列為基礎(chǔ)構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中，Y23菌株與9株典型鏈霉菌聚成一支，其同源性為97.9～99.3％，其中Y23菌株的16S rRNA序列與S.lavendulae的同源性最高，其同源性為99.3％，但該菌株與S. lavendulae的形態(tài)特征和生理生化特性方面存在一定的差異。因此，將Y23菌株的分類地位初步確定為薰衣草鏈霉菌(Strept

5、omyceslavendulae)。 3.初步研究了Y23菌株的發(fā)酵條件，確定了最佳培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件。單因素發(fā)酵試驗(yàn)和正交試驗(yàn)表明：碳源以1％可溶性淀粉最佳，氮源以0.4％酵母粉最好，無機(jī)鹽以0.025％磷酸氫二鉀為最佳，種子液菌齡36 h，接種量6％，發(fā)酵時間96 h，培養(yǎng)基初始pH 7.0，裝液量為50 mL/250 mL三角瓶，發(fā)酵溫度26℃，搖床轉(zhuǎn)速200 r/min。這些結(jié)果對在生產(chǎn)實(shí)際中菌株的應(yīng)用、抗生素的分離純