間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性研究及肌腱損傷和肌肉損傷動物模型的構(gòu)建.pdf

1、肌腱損傷和肌肉損傷是體育運動中常見的運動性疾病，影響運動員機能水平和運動能力的發(fā)揮，成為臨床醫(yī)學(xué)和運動醫(yī)學(xué)的主要研究問題。干細胞在個體生長發(fā)育和病理組織再生修復(fù)中具有重要作用。干細胞發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的研究為肌腱和肌肉生理、病理機制的研究提供了基礎(chǔ)，同時為干細胞促進損傷的修復(fù)提供實驗基礎(chǔ)。本研究主要建立了肌腱干細胞和肌肉衛(wèi)星細胞體外擴增培養(yǎng)體系，研究其生物學(xué)特性，建立肌腱損傷和肌肉損傷小鼠動物模型，研究干細胞在運動性損傷修復(fù)中的作用，得

2、到以下結(jié)果：
　　1.采用 I型膠原酶消化分離胎牛和仔豬跟腱來源肌腱干細胞，分離后的細胞在體外培養(yǎng)條件下分別傳代至43代和11代；分別通過RT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測法對兩個物種來源的肌腱干細胞進行特異性標記物鑒定；免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，細胞對 CollagenⅠ、CollagenⅢ、CD105、CD44、Tenascin-C,Tnmd、nucleostemin等均表達陽性；RT-PCR結(jié)果顯示，不同傳代次數(shù)的細胞均表達 C

3、ollagenⅠ和 CollagenⅢ，不表達 CollagenⅡ，表明所分離的細胞為肌腱干細胞；對分離的細胞進行生物學(xué)特性鑒定；在體外通過不同誘導(dǎo)液，將肌腱干細胞分別誘導(dǎo)成成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞，RT-PCR檢測到軟骨細胞特異性基因均陽性表達；
　　2.采用I型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化法消化仔豬脛骨前肌肌肉組織，分離的細胞接種后通過差速培養(yǎng)法純化并培養(yǎng)至12代，通過 RT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測鑒定細胞均表達Myod，Moy

4、genin，Pax7，c-Met，PCNA和 Nanog，對分離純化后的細胞進行生物學(xué)特性和多分化潛能研究。
　　3.采用心臟毒素（CTX）構(gòu)建小鼠肌肉損傷模型，石蠟病理切片顯示肌肉正常組織被破壞，血清學(xué)檢測肌肉中肌酸激酶（CK）含量明顯超出正常范圍，對肌肉衛(wèi)星細胞進行細胞示蹤劑（CM-Dil）標記后移植到損傷部位，組織學(xué)和血清學(xué)結(jié)果顯示肌肉損傷有所恢復(fù)；通過I型膠原酶誘導(dǎo)的小鼠肌腱損傷制備小鼠肌腱損傷模型，石蠟切片顯示肌腱膠原排

5、列紊亂，肌腱基質(zhì)嚴重破壞，對肌腱干細胞用 C M-Dil標記，將標記后的細胞注射到小鼠肌腱損傷位點，觀察組織學(xué)和血清學(xué)相關(guān)指標，結(jié)果顯示細胞移植治療組損傷肌腱有良好修復(fù)；
　　綜上所述，本文介紹了肌腱損傷、肌肉損傷和干細胞研究進展，在體外成功分離、培養(yǎng)了胎牛、仔豬跟腱來源TDSCs和仔豬肌肉衛(wèi)星細胞，并對其生物學(xué)特性和多分化潛能進行了研究；通過干細胞體外移植治療，損傷的小鼠肌腱和肌肉組織得到恢復(fù),初步為以干細胞為基礎(chǔ)的細胞療法治療