貫葉連翹提取物對三氯化鋁暴露大鼠海馬腦區(qū)的保護作用及機制.pdf

1、鋁是一種蓄積性強神經(jīng)毒物，可通過改變海馬腦區(qū)氧化應激水平、炎性反應、β樣淀粉蛋白(Aβ)表達、樹突棘密度導致人或其他模型動物認知功能障礙，且目前尚無有效的治療手段。貫葉連翹提取物（Hypericum perforatum extract，HP）是一種天然植物藥物，具有抗氧化、抗炎癥反應、調(diào)節(jié)Aβ生成和維持樹突棘穩(wěn)定的藥理作用。HP對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護機制和藥理作用均與鋁神經(jīng)毒理機制相拮抗，故推測HP可保護鋁暴露大鼠神經(jīng)系統(tǒng)免受鋁毒危害。

2、
　　為探討HP對AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)的保護作用及機制，本研究選用8周齡雄性Wistar大鼠120只，隨機分為空白組（C組）、染鋁組(Al組:按150mg/kg的劑量灌胃給予AlCl390d);HP干預組(Al+HP組:按150mg/kg的劑量灌胃給予AlCl390d;給予AlCl330d后，按300mg/kg的劑量灌胃給予HP60d)和HP對照組(HP組:按300mg/kg的劑量灌胃給予HP60d)。給藥結束后，通過Mor

3、ris水迷宮和曠場行為試驗，探究HP對AlCl3暴露大鼠認知功能的影響;通過對大鼠體重和腦組織質(zhì)量的稱量及海馬鋁含量的檢測，探究HP對AlCl3暴露大鼠腦體系數(shù)的影響;通過檢測海馬腦區(qū)ROS、GSH、MDA、8-OHdG和羰基含量，SOD活性，Nrf2核蛋白和總蛋白表達以及OH-1、GCLC和NQO1 mRNA表達，觀測海馬腦區(qū)超微結構，探究HP對AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)氧化應激和Nrf2信號的影響;通過檢測海馬腦區(qū)MHCⅡ和GFAP

4、蛋白表達，IL-6和TNF-α含量，NF-κB核蛋白和總蛋白表達以及IL-6和TNF-α mRNA表達，探究HP對AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)炎癥反應和NF-κB信號的影響;通過檢測海馬腦區(qū)Aβ42含量，淀粉樣斑塊生成狀況以及APP、ADAM9、ADAM10、ADAM17、BACE1、PS1和PS2 mRNA表達，探究HP對AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)Aβ及其相關生成因子影響;通過檢測海馬腦區(qū)樹突棘密度、BDNF蛋白表達和F-actin/G

5、-actin蛋白比率，探究HP對AlCl3暴露大鼠海馬腦區(qū)樹突棘密度及其調(diào)節(jié)因子的影響。
　　試驗結果:
　　(1) Morris水迷宮試驗顯示，Al組到達平臺時間顯著高于C組(p＜0.05)，目標象限滯留時間和穿越平臺位置次數(shù)量顯著低于C組(p＜0.01);曠場探索試驗顯示，Al組穿越方格個數(shù)和站立次數(shù)均顯著低于C組(p＜0.05)，說明AlCl3可導致大鼠認知功能障礙，鋁神經(jīng)毒性損傷大鼠模型建立成功。HP干預后，Morr

6、is水迷宮試驗顯示，Al+HP組到達平臺時間顯著低于Al組(p＜0.05)，目標象限滯留時間和穿越平臺位置次數(shù)量顯著高于Al組;曠場探索試驗顯示，Al+HP組穿越方格個數(shù)和站立次數(shù)均顯著高于Al組(p＜0.05)，表明HP可有效緩解AlCl3所致大鼠神經(jīng)毒性損傷。
　　(2)體重、腦體系數(shù)和海馬鋁含量檢測顯示，各組間大鼠體重和腦體系數(shù)無顯著差異(p＞0.05);Al組海馬鋁含量顯著高于C組(p＜0.01)，Al+HP組海馬鋁含量低

7、于Al組(p＜0.05)，表明HP可降低鋁暴露大鼠海馬鋁含量。
　　(3)氧化應激標志物檢測顯示，Al組大鼠海馬腦區(qū)中ROS、羰基、8-OHdG和MDA含量顯著高于C組(p＜0.01)，GSH含量和SOD活性顯著低于C組(p＜0.01);而Al+HP組ROS、羰基、8-OHdG和MDA含量顯著低于Al組(p＜0.05)，GSH含量和SOD活性顯著高于Al組(p＜0.05)，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)氧化損傷。
　

8、　透射電鏡觀察顯示，C組海馬腦區(qū)神經(jīng)細胞胞質(zhì)均勻，核膜完整，核質(zhì)均勻，線粒體數(shù)量較多，線粒體膜結構完整，線粒體脊結構清晰;Al組海馬腦區(qū)神經(jīng)細胞出現(xiàn)核膜不完整，核質(zhì)溶解，線粒體膨脹，脊結構模糊不清，甚至出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象;Al+HP組和HP與C組相似，無顯著病理變化，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)超微結構損傷。
　　Nrf2信號檢測顯示，Al組和Al+HP組Nrf2核蛋白和總蛋白表達均顯著高于C組(p＜0.05)，OH-1 m

9、RNA、GCLC mRNA和NQO1 mRNA表達均顯著高于C組(p＜0.05);而Al+HP組Nrf2核蛋白和總蛋白表達均顯著高于Al組(p＜0.01)，OH-1 mRNA、GCLC mRNA和NQO1 mRNA表達均顯著高于Al組(p＜0.01)，表明HP可激活Nrf2信號緩解AlCl3致海馬腦區(qū)氧化應激。
　　(4)膠質(zhì)細胞激活標志物和促炎性因子檢測顯示，Al組MHCⅡ和GFAP蛋白表達以及IL-6和TNF-α含量均顯著高于

10、C組(p＜0.01)，Al+HP組MHCⅡ和GFAP蛋白表達以及IL-6和TNF-α含量均顯著低于Al組(p＜0.01)，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)炎性反應。
　　NF-κB信號檢測顯示，Al組NF-κB核蛋白和總蛋白表達以及IL-6和TNF-α mRNA表達均顯著高于C組(p＜0.01)，Al+HP組NF-κB核蛋白和總蛋白表達以及IL-6和TNF-αmRNA表達均低于Al組(p＜0.05)，表明HP可抑制NF-κB

11、信號緩解AlCl3致海馬腦區(qū)炎癥反應
　　(5) Aβ42含量檢測顯示，Al組海馬腦區(qū)Aβ42含量顯著高于C組(p＜0.01)，而Al+HP組海馬腦區(qū)Aβ42含量顯著高于C組(p＜0.01)。另外，剛果紅染色觀測顯示，Al組海馬腦區(qū)可見大量紅色淀粉樣斑塊，而HP+Al組紅色淀粉樣斑塊極少，表明HP可緩解AlCl3致大鼠海馬腦區(qū)Aβ生成增多。
　　APP及其相關水解酶檢測顯示，Al組海馬腦區(qū)APP，BACE1，PS1和PS2

12、mRNA表達顯著高于C組(p＜0.01)，ADAM9、ADAM10和ADAM17 mRNA表達顯著低于C組(p＜0.01);而Al+HP組海馬腦區(qū)APP、BACE1、PS1和PS2 mRNA表達低于Al組(p＜0.01)，Al+HP組ADAM9、ADAM10和ADAM17 mRNA表達高于Al組(p＜0.05)，表明HP可抑制APP mRNA表達并改變其水解途徑緩解AlCl3致大鼠海馬Aβ生成增加。
　　(6)樹突棘密度檢測顯示，

13、Al組DG區(qū)、CAl區(qū)以及CA3區(qū)低于C組(p＜0.05)，Al+HP組DG區(qū)、CA1區(qū)以及CA3區(qū)高于Al組(p＜0.05)，表明HP緩解AlCl3所致的大鼠海馬腦區(qū)樹突棘密度降低。
　　BDNF蛋白表達和F-actin/G-actin蛋白比率檢測顯示，Al組BDNF蛋白表達和F-actin/G-actin蛋白比率顯著低于C組(p＜0.01);而Al+HP組BDNF蛋白表達和F-actin/G-actin蛋白比率高于Al組(p＜