應(yīng)用SSH-PCR技術(shù)進(jìn)行混合血樣STR分型的初步研究.pdf

1、研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名顰盈趁日期：k紐[：∑中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書■本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研

2、究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：本所占的比例，基因型的組合，及待擴(kuò)增樣本的DNA總量，即混合樣

3、本DNA分型的難易程度不盡相同?；旌蠘颖局休^少成分所占的比例小于5％或1：19，通常是無法檢測到。AmpFlSTR試劑盒建議，混合樣本中最少的成分應(yīng)該大于35pg，才能得到可靠的分型結(jié)果。提高混合樣本中較少組分DNA分型成功率，是法醫(yī)工作者急需解決的難題之一，同時在醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)領(lǐng)域也具有重要的研究價值。SSHPCR(SuppressionSubtractiveHybridizationSSH)是1996年Diatchenko等以抑制性PC

4、R為基礎(chǔ)、并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)化與消減雜交技術(shù)，建立的一項篩選與分離未知差異表達(dá)基因的新技術(shù)。其基本過程是：抽提兩種不同細(xì)胞的差異mRNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再用限制性內(nèi)切酶消化cDNA成平術(shù)端片段，將待研究的cDNA連接接頭后作為檢測子，將另一cDNA作為驅(qū)動子進(jìn)行兩輪雜交，最后通過兩次PCR擴(kuò)增得到差異表達(dá)的cDNA。該方法運用了雜交二級動力學(xué)原理，即豐度高的單鏈DNA在退火時產(chǎn)生同源雜交的速度快于豐度低的單鏈DNA，從而使原來在豐度上有差別

5、的單鏈DNA相對含量達(dá)到基本一致。而抑制PCR則是通過利用鏈內(nèi)退火優(yōu)于鏈間退火的特點，使兩端接上具有反向末端重復(fù)序列的同一接頭的非目片段在退火時產(chǎn)生類似發(fā)夾的互補結(jié)構(gòu)，無法作為模板與引物配對，從而選擇性地抑制非目的基因片段的擴(kuò)增。在標(biāo)準(zhǔn)體系中，運用SSH進(jìn)行一輪消減雜交，可富集稀有序列1000倍以上，使某些低豐度表達(dá)的mRNA有望被檢出。鑒于SSH技術(shù)富集差異DNA序列的能力，本研究擬以PCRSTR擴(kuò)增產(chǎn)物為研究對象，直接連接接頭，并通