應(yīng)用STR-PCR技術(shù)快速診斷21三體綜合征.pdf

1、研究背景:21三體綜合征又名唐氏綜合征(Down syndrome,DS),是最常見的染色體病。目前該病尚無有效的治療方法,21三體患兒給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。由于其確切病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確,故做不到孕前干預(yù),只能通過產(chǎn)前診斷及治療性流產(chǎn)以達(dá)到預(yù)防21三體患兒的出生。已出生21三體患兒的診斷主要是依靠外周血染色體核型分析技術(shù),但是該技術(shù)存在周期長、操作煩瑣等缺點(diǎn)。目前21三體綜合征產(chǎn)前診斷主要通過絨毛膜取樣、羊膜腔穿刺、臍帶穿刺獲

2、取胎兒細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析。但是這些技術(shù)存在成本高、細(xì)胞培養(yǎng)易失敗及嚴(yán)格的時(shí)間要求等缺點(diǎn)。近年發(fā)展起來的熒光原位雜交技術(shù)(FISH),具備快速的優(yōu)勢,對羊膜腔穿刺術(shù)是一個(gè)很好的補(bǔ)充,但因費(fèi)用昂貴一般孕婦難以接受。以上方法雖然能診斷染色體非整倍體,卻對異常染色體的親源性不能判斷,而且不能檢測出由于21號染色體微小片段的重復(fù)引起的唐氏綜合征。隨著分子遺傳學(xué)技術(shù)的發(fā)展,多種分子遺傳學(xué)方法用于21三體的診斷。1995年,Fuentes等將21

3、三體綜合征的染色體的關(guān)鍵區(qū)域(DSCR)定位于21q22.1-q22.2。選取21號染色體上關(guān)鍵區(qū)域上的高度多態(tài)性的短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat,STR)位點(diǎn),利用聚合酶鏈反應(yīng)(poly-merase chainreaction,PCR)技術(shù)擴(kuò)增,非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,硝酸銀染色技術(shù),可以診斷21三體。該方法與傳統(tǒng)染色體分析相比優(yōu)點(diǎn)為省時(shí)、操作簡便、費(fèi)用低等,而且STR-PCR技術(shù)可以檢測到關(guān)鍵區(qū)域微小片段

4、的重復(fù)引起的21三體綜合征,輔助染色體分析,可以提高唐氏綜合征的檢出率。研究目的探討STR-PCR技術(shù)在唐氏綜合征診斷中的應(yīng)用價(jià)值,建立快速高效診斷唐氏綜合征的分子遺傳學(xué)方法,輔助外周血及羊水細(xì)胞染色體核型分析。
　　材料與方法：1.研究對象包括60例染色體核型分析結(jié)果為21三體患兒的外周血及其父母外周血和50例羊水標(biāo)本及部分胎兒父母外周血。2.研究方法選取21號染色體關(guān)鍵區(qū)域及其附近的8個(gè)STR位點(diǎn),引物序列來自GenBank。

5、用Chelex法提取標(biāo)本DNA,利用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)擴(kuò)增,非變性聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳,硝酸銀染色技術(shù),通過觀察電泳條帶,診斷21三體。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.60例21三體患兒58例被檢出,檢出率為96.7％。2.外周血標(biāo)本中49例患兒額外的一條21號染色體來自母親,5例來自父親,4例不能判斷親源性。3.50例羊水標(biāo)本檢出10例21三體患兒,9例與羊水細(xì)胞染色體分析結(jié)果一致,1例羊水細(xì)胞染色體核型分析結(jié)果為“46,XY”。8例多余的

6、21號染色體及1例部分21號染色體片段均來自母親,1例額外的染色體來自父親。4.綜合外周血及羊水結(jié)果8個(gè)STR位點(diǎn)D21S1409、D21S1433、D21S11、D21S1444、D21S1437、D21S1414、D21S1442、D21S1809的雜合度為:0.69、0.84、0.88、0.81、0.75、0.79、0.82、0.68,對21三體的檢出率為:30％、61％、67％、59％、43％、45％、58％、27％。聯(lián)合使用8

7、個(gè)位點(diǎn)對21三體的檢出率為97％。
　　結(jié)論：1.本研究所選取的8個(gè)STR位點(diǎn)具有高度多態(tài)性,具有較高的雜合度,是較好的遺傳標(biāo)記。2.本研究聯(lián)合應(yīng)用8個(gè)STR位點(diǎn),對21三體綜合征的檢出率達(dá)到97％,表明STR-PCR技術(shù)是一種快速、簡便檢測21三體綜合征的方法,可以輔助染色體核型分析,對21三體綜合征進(jìn)行診斷。3.STR-PCR技術(shù)可以判斷額外染色體起源,為進(jìn)一步探討21三體綜合征。4.分子遺傳學(xué)方法的發(fā)展為21三體綜合征的診斷