鑭抑制脂多糖誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的機(jī)制.pdf

1、目的和意義： 一氧化氮(NO)是炎癥反應(yīng)過(guò)程中的重要介質(zhì)和調(diào)節(jié)因子，它雖可殺滅侵入機(jī)體的病原微生物，維持機(jī)體正常的免疫防御功能，但過(guò)量NO也對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用。體內(nèi)NO生成的唯一途徑是由一氧化氮合酶(iNOS)催化L-精氨酸合成。研究證明，脂多糖(LPS)等刺激因子能誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞高表達(dá)iNOS，從而合成過(guò)量NO，引起一系列嚴(yán)重病理反應(yīng)，如感染性休克和多器官功能衰竭(MOF)等。因此抑制iNOS的過(guò)量表達(dá)以控制NO的產(chǎn)生，

2、對(duì)臨床相關(guān)疾病的治療具有重要意義。鑭是一種具有多種生物學(xué)活性的稀土元素，前期研究已證實(shí)鑭具有結(jié)合LPS抑制LPS生物學(xué)效應(yīng)的作用，本研究進(jìn)一步探討鑭對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響，同時(shí)觀察鑭對(duì)iNOS基因轉(zhuǎn)錄的重要調(diào)控因子-核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)活化的可能影響，以探討鑭影響iNOS表達(dá)的可能機(jī)制，為研究NO拈抗劑及開(kāi)發(fā)稀土的藥用價(jià)值提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究?jī)?nèi)容和方法： 1.通過(guò)MTT法觀察不同濃度氯化鑭(L

3、aCl3)(2.5μmol/L～40μmol/L_)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響。 2.采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色、Western Blotting及RT-PCR方法觀察LaCl3對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞iNOS蛋白及基因表達(dá)的影響，同時(shí)觀察NO產(chǎn)物的變化。 3.采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色及Western Blotting方法觀察LaCl3對(duì)LPS活化小鼠巨噬細(xì)胞NF-κB的影響。 結(jié)果： 1.一定濃度的L

4、aCl3(2.5～40μmol/L)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的活性無(wú)明顯影響。 2.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色及Western Blotting結(jié)果顯示低濃度的LaCl3(2.5μmol/L)能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞iNOS的蛋白表達(dá)，而對(duì)正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞iNOS蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。 3.RT-PCR結(jié)果顯示LaCl3能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞iNOSmRNA的表達(dá)，而對(duì)正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞iNOSmRNA表達(dá)

5、無(wú)明顯影響。 4.NO含量測(cè)定結(jié)果顯示LaCl3能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO。 5.NF-kB/p65活化狀況檢測(cè)結(jié)果顯示，LaCl3能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞NF-kB/p65核轉(zhuǎn)位，而對(duì)正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞NF-kB/p65活性無(wú)明顯影響。 結(jié)論： 1.LaCl3能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞iNOS基因及蛋白的表達(dá)，從而顯著降低NO的分泌水平。 2.LaCl3可能