鑭抑制脂多糖誘導小鼠巨噬細胞產生一氧化氮的機制.pdf

1、目的和意義： 一氧化氮(NO)是炎癥反應過程中的重要介質和調節(jié)因子，它雖可殺滅侵入機體的病原微生物，維持機體正常的免疫防御功能，但過量NO也對宿主細胞產生損傷作用。體內NO生成的唯一途徑是由一氧化氮合酶(iNOS)催化L-精氨酸合成。研究證明，脂多糖(LPS)等刺激因子能誘導單核巨噬細胞高表達iNOS，從而合成過量NO，引起一系列嚴重病理反應，如感染性休克和多器官功能衰竭(MOF)等。因此抑制iNOS的過量表達以控制NO的產生，

2、對臨床相關疾病的治療具有重要意義。鑭是一種具有多種生物學活性的稀土元素，前期研究已證實鑭具有結合LPS抑制LPS生物學效應的作用，本研究進一步探討鑭對LPS誘導的小鼠巨噬細胞產生NO的影響，同時觀察鑭對iNOS基因轉錄的重要調控因子-核轉錄因子-κB(NF-κB)活化的可能影響，以探討鑭影響iNOS表達的可能機制，為研究NO拈抗劑及開發(fā)稀土的藥用價值提供實驗依據(jù)。 研究內容和方法： 1.通過MTT法觀察不同濃度氯化鑭(L

3、aCl3)(2.5μmol/L～40μmol/L_)對小鼠巨噬細胞生長活性的影響。 2.采用免疫熒光細胞化學染色、Western Blotting及RT-PCR方法觀察LaCl3對LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOS蛋白及基因表達的影響，同時觀察NO產物的變化。 3.采用免疫熒光細胞化學染色及Western Blotting方法觀察LaCl3對LPS活化小鼠巨噬細胞NF-κB的影響。 結果： 1.一定濃度的L

4、aCl3(2.5～40μmol/L)對小鼠巨噬細胞的活性無明顯影響。 2.免疫熒光細胞化學染色及Western Blotting結果顯示低濃度的LaCl3(2.5μmol/L)能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOS的蛋白表達，而對正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞iNOS蛋白表達無明顯影響。 3.RT-PCR結果顯示LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOSmRNA的表達，而對正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞iNOSmRNA表達

5、無明顯影響。 4.NO含量測定結果顯示LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞產生NO。 5.NF-kB/p65活化狀況檢測結果顯示，LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞NF-kB/p65核轉位，而對正常培養(yǎng)的小鼠巨噬細胞NF-kB/p65活性無明顯影響。 結論： 1.LaCl3能顯著抑制LPS誘導的小鼠巨噬細胞iNOS基因及蛋白的表達，從而顯著降低NO的分泌水平。 2.LaCl3可能