登革熱流行病學調查及重癥登革熱病理機制研究.pdf

1、本研究首先對中國的登革熱流行病學進行系統(tǒng)描繪，并從GenBank數(shù)據(jù)庫中篩查出所有分離自中國的登革基因序列共749條，進行進化發(fā)育分析。結果顯示，自1978年至2014年間，我國共計報告登革熱感染病例累計達735735例。1978年～1991年間疫情主要集中在廣東省和海南省，自1991年后集中在廣東、云南、浙江和福建四省，占全國感染病例的90％以上。死亡人數(shù)有507人，多數(shù)在1988年以前。感染人群的年齡分布呈扇形，集中在20～45歲之

2、間。流行的登革毒株主要為Ⅰ型和Ⅱ型，呈交叉循環(huán)或共同感染模式。存在本地循環(huán)傳播和各省跨時空循環(huán)傳播交替出現(xiàn)的特點，也存在同一毒株的本地延續(xù)性傳播。
　　將2013年云南登革流行株全基因序列與Ⅲ型登革病毒標準株對比，確定共有62個氨基酸突變，與其親緣關系最近的為2013年海南流行株及2002年孟加拉國流行株。2015年獲得的17個登革全基因序列經內部比對，共找到217處堿基突變位點，其中非結構蛋白區(qū)域共有213處。將42個結構蛋白基

3、因序列與Ⅱ型標準株進行比對，共發(fā)現(xiàn)36個氨基酸突變產生。進化分析顯示，該流行株與2004年斯里蘭卡流行株及2001年印度流行株屬于同一進化分支。
　　對375例登革熱患者進行臨床病理分析，發(fā)現(xiàn)患者普遍存在不同程度的炎癥反應、血管滲漏和肝損傷。血清中病毒載量并不是導致重癥登革熱的唯一原因，NS1含量、補體的合成和消耗與重癥登革熱具有相關性。
　　利用Ⅱ登革病毒及其同型別前膜蛋白prM抗體建立人全血ADE模型，發(fā)現(xiàn)ADE感染組病

4、毒拷貝數(shù)高于普通感染組2.94倍，補體C3水平降低61.5％。兩個登革感染組上清中均有大量C3a、C5a產生，補體C3bBb含量也明顯升高，其中ADE組高于普通感染組2.6倍，而C1q含量變化不大，證明補體旁路途徑過度激活是ADE感染過程中的效應機制之一。
　　最后利用陰性分離的單核細胞建立抗體依賴增強感染體外模型。兩個登革感染組上清中均有大量C3a、C5a產生，伴隨IL-10的表達升高。經免疫共沉淀、質譜鑒定及Western B

5、lot驗證，證明膜輔助蛋白CD46與NS1具有相互作用。與單核細胞ADE模型共培養(yǎng)后免疫熒光染色檢測HuVEC表面C5b-9的形成，伊紅染色觀察細胞骨架改變。結果ADE組HuVEC有明顯的病理損傷，提示補體過度激活可能是導致血管內皮細胞損傷和血管滲漏的原因之一。
　　綜合上述研究結果，我們提出了“補體風暴”假說。即登革病毒NS1在細胞中大量復制并游離至血液中，循環(huán)遷移到全身各處。通過競爭結合補體調控因子CD46，使CD46散失或部