酪氨酸激酶2(DDR2)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的:通過對不同級別腦膠質(zhì)瘤組織及正常腦組織中的酪氨酸激酶2及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子蛋白表達(dá)含量的測定，探討膠質(zhì)瘤中酪氨酸激酶2和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)意義及兩者的相關(guān)性。
　　方法:收集自2013年5月-2014年10月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本85例，其中WHO分級Ⅰ級腦膠質(zhì)瘤14例，Ⅱ級腦膠質(zhì)瘤27例，Ⅲ級腦膠質(zhì)瘤25例，Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤19例。所取病例標(biāo)本病理診斷均由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科按

2、照WHO腦腫瘤分級診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。正常腦組織標(biāo)本取自因腦外傷或者腦出血患者需做顱內(nèi)減壓術(shù)所取的腦組織標(biāo)本，共取15例作為對照組。本實驗所取腦膠質(zhì)瘤病理均為入院后初次診斷，手術(shù)前均未經(jīng)過任何放化療等抗腫瘤治療。所有實驗用標(biāo)本，均于術(shù)中切下病理組織后立即取材，10％的福爾馬林固定及液氮罐-80℃保存。將以上標(biāo)本分為五組:正常腦組織組，Ⅰ級膠質(zhì)瘤組，Ⅱ級膠質(zhì)瘤組，Ⅲ級膠質(zhì)瘤組，Ⅳ級膠質(zhì)瘤組。采用免疫組織化學(xué)方法檢測VEGF和DDR2在上述五組病

3、理組織切片中的表達(dá)情況，并用統(tǒng)計軟件SPSS13.0分析其表達(dá)特點及相關(guān)性，采用免疫熒光法檢測VEGF和DDR2在同一切片中表達(dá)情況并觀測兩種因子表達(dá)特點。應(yīng)用Western Blot法同測定上述五組標(biāo)本VEGF和DDR2的蛋白條帶，并應(yīng)用相關(guān)軟件檢測五組條帶的灰度值，應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組化果顯示:VEGF在正常腦組織、Ⅰ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅱ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅲ級腦膠質(zhì)瘤、ⅣV級腦膠質(zhì)瘤表達(dá)陽性

4、率分別為6.67％、71.43％、88.89％、100.00％、100.00％，隨著腫瘤惡性程度增高，VEGF表達(dá)量增加，Spearman等級相關(guān)得出相關(guān)系數(shù)r=0.698，P＜0.01，VEGF表達(dá)與腫瘤分級呈正相關(guān)，即腫瘤分級越高，VEGF表達(dá)陽性率越高，圖片見:Fig1。統(tǒng)計圖表詳見Table1、Table3;
　　2、免疫組化結(jié)果顯示:DDR2在正常腦組織、Ⅰ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅱ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅲ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤表達(dá)陽性率分

5、別為33.33％、78.57％、88.89％、96.00％、100.00％，隨著腫瘤惡性程度增高，DDR2表達(dá)量增加，Spearman等級相關(guān)得出相關(guān)系數(shù)r=0.588，P＜0.01，DDR2表達(dá)與腫瘤分級呈正相關(guān)，即腫瘤分級越高，DDR2表達(dá)陽性率越高。圖片見:Fig2詳見Table2、Table4;
　　3、對VEGF、DDR2的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析。Spearman等級相關(guān)得出相關(guān)系數(shù)r=0.928，P＜0.01，即VEG

6、F表達(dá)與DDR2表達(dá)呈高度正相關(guān)，即VEGF表達(dá)陽性等級越高，DDR2表達(dá)陽性等級越高，詳見Table5;
　　4、采用免疫熒光雙標(biāo)法觀察同一病理組織中兩種因子分布情況。紅色熒光為VEGF因子，綠色熒光為DDR2因子，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核。可見在同一組織中兩種因子的分布有聚集性。詳見Fig3、Fig4、Fig5;
　　5蛋白含量:采用western blot方法對標(biāo)本的蛋白含量進(jìn)行測定。觀察DDR2、VEGF及action在正常

7、腦組織、Ⅰ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅱ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅲ級腦膠質(zhì)瘤、Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤中的蛋白表達(dá)情況，結(jié)果以測定的灰度值為準(zhǔn)。分析VEGF、DDR2的相對表達(dá)量，VEGF的相對表達(dá)量逐漸升高，DDR2的相對表達(dá)量逐漸增高。各級別腦膠質(zhì)瘤組分別與正常腦組織組向比較，采用單因素方差分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05，均有統(tǒng)計學(xué)意義。詳見Table6、Fig6、Fig7、Fig8。
　　結(jié)論:
　　1、與正常腦組織的對照組相比，各腦膠質(zhì)瘤組中的

8、DDR2表達(dá)及VEGF表達(dá)明顯增高，且隨著腦膠質(zhì)瘤的級別增加表達(dá)增高越明顯，存在顯著性差異（P＜0.01)。
　　2、與正常腦組織的對照組相比，各腦膠質(zhì)瘤組中的DDR2及VEGF蛋白含量明顯增高，且隨著腦膠質(zhì)瘤級別增高，兩種因子所表達(dá)的蛋白表達(dá)越高。蛋白表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤級別存在正相關(guān)性。提示腫瘤的惡性水平在一定程度上可以影響著DDR2的蛋白含量的表達(dá)。
　　3、在免疫熒光圖片中可以見到，在多組標(biāo)本中，DDR2蛋白表達(dá)部位與VE