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文檔簡介
1、楊樹是我國重要的樹種之一,它生長速度快,易繁殖,在木材工業(yè)、紙漿業(yè)和綠化帶建設中廣泛應用,是人工林和大面積速生商品林建設的首選樹種。 以歐美楊107離體葉片為材料,進行葉片直接再生不定芽實驗,建立歐美楊107穩(wěn)定高效的葉片再生體系,確立了適宜的葉片直接再生不定芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。通過農桿菌介導首次將CMO基因轉入歐美楊107,獲得了耐鹽性顯著提高的轉基因植株。 研究結果表明,附加BA0.8mg/L,IAA0.05mg/
2、L的MS培養(yǎng)基可以高頻誘導不定芽的產生。待小芽長至2-3cm時,轉移到生根培養(yǎng)基(MS+NAA0.3mg/L)上,10d后生根,繼續(xù)培養(yǎng)得到完整的植株。 本研究還分別進行了抑菌性抗生素頭孢霉素(Cef)和選擇性抗生素卡那霉素(Km)與潮霉素(Hyg)的敏感性試驗,結果表明Cef250mg/L即能有效抑制農桿菌過度繁殖,葉片外植體分化未受到明顯的抑制。Km15mg/L,Hyg5mg/L可作為誘導葉片芽分化的臨界篩選濃度;Km20m
3、g/L可作為生根時篩選抗性植株的濃度。 在農桿菌工程菌液中添加200μmol/L的乙酰丁香酮(As)可以顯著提高抗性芽誘導率。 將CMO基因導入歐美楊107,經不定芽誘導及生根階段的卡那霉素連續(xù)篩選,獲得了6株抗性材料,對它們做PCR及Southern雜交檢測,有1株呈陽性,證明CMO基因成功整合到歐美楊107基因組中。 轉基因植株在經過5天0.5﹪NaCl脅迫后,相對電導率為17.2﹪,而未轉基因植株為26.4
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